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抗生素的合理应用及临床滥用（可编辑）
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抗生素的合理应用及临床滥用（可编辑）
官方公共微信兔支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立及初步应用--《南京农业大学》2014年硕士论文
兔支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立及初步应用
【摘要】：兔波氏杆菌病是由支气管败血渡氏杆菌(Bordetella bronchiseptica, Bb),也称兔支气管鲍特杆菌或博德特氏杆菌,是一种能广泛的寄生在家畜、野生动物及实验动物呼吸道上皮细胞纤毛上的革兰氏阴性需氧小杆菌,能引起兔、猪、马、狗、鼠等多种哺乳动物的呼吸道疾病,感染动物主要以鼻炎和支气管肺炎为特征。近年来,也有该菌感染人引起发病的报道,尤其是年幼的儿童和抵抗力较差的老年人。在我国,该茵在兔群中的感染率比较高,无论是幼兔、青年兔、种兔均有感染,给养兔业造成巨大的经济损失。利用FHA基因设计了1对特异性引物,建立了一种PCR检测方法,旨在建立一种简便、快速、敏感、特异的诊断方法,主要实验和结果如下：1.兔支气管败血波氏杆菌的分离和鉴定：采集安徽滁州某兔场送检的疑似兔支气管败血波士杆菌感染的病死幼兔的鼻腔分泌物、肺脏、肝脏样品进行病原菌的分离与鉴定。本实验结合菌落形态、染色镜检、培养特性、血清学实验、生化鉴定和16SrRNAPCR扩增,确定该分离菌为兔支气管败血波氏杆菌。药物敏感实验研究表明：该病菌对强力霉素、氟苯尼考、庆大霉素、丁胺卡那霉素等高度敏感；对卡那霉素、链霉素、麦迪霉素、先锋噻肟等中等敏感；对氨苄青霉素、痢特灵、洁霉素、呋喃妥因等不敏感。人工感染实验结果显示,实验兔能复制出自然病例。2.兔支气管败血波氏杆菌PCR方法的建立：分离鉴定获得的兔支气管败血波氏杆菌提取DNA,根据丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)基因序列(AF111796)设计了一对引物,PCR扩增,在734bp处扩增出一条与预期片段大小一致,特异性目的条带。用DNAStar软件分析测序结果表明,扩增片段与预期片段相符,该序列命名为FHA-734,和GenBank上其它波氏杆菌分离株(NC002929、NC018828、 NC019382)比较,核苷酸同源性为92.9%～96.6%。并做了PCR条件优化实验,结果显示当MgCl2添加量为1.0μl、退火温度选择58℃、循环数设置30个循环时显示有清晰特异的目的条带。3.PCR方法在临床的应用：从安徽、江苏不同地区的兔场无菌鼻拭子采取兔鼻拭子92份进行培养,利用兔支气管败血波氏杆菌的FH八基因序列设计引物进行PCR快速检测,并与传统的血清凝集实验进行对比,结果显示利用PC涨术检测阳性率为78.3%,血清凝集实验结果为33.7%。用PC胀速检测法对某兔场幼兔、青年兔和种兔随机抽样检测,结果显示幼兔Bb阳性率为90%；青年兔Bb阳性率为85%；种兔Bb阳性率为80%。
【关键词】：
【学位授予单位】：南京农业大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：S852.61【目录】：
摘要6-8ABSTRACT8-10文中所引部分缩略语10-11第一章 文献综述11-27 1 支气管败血波氏杆菌的病原学11-17
1.1 细菌的形态和生化特性11-12
1.2 抗原结构12-16
1.3 支气管败血波氏杆菌的药物敏感性16-17 2 流行病学和致病机理17-18 3 临床症状及病理变化18
3.1 临床症状18
3.2 病理变化18 4 兔支气管败血波氏杆菌的诊断方法18-19
4.1 微生物学诊断18-19
4.2 血清学诊断19
4.3 分子生物学诊断19 5 预防与控制19-20
5.1 药物治疗19-20
5.2 免疫接种20
5.3 防治20 6 研究目的与意义20-22 参考文献22-27第二章 兔支气管败血波氏杆菌的分离和鉴定27-45 摘要27 1 材料与方法27-33
1.1 病料来源27-28
1.2 培养基与血清28
1.3 酶及主要试剂28
1.4 主要的仪器与设备28
1.5 实验动物28-29
1.6 实验方法29-33 2 结果与分析33-43
2.1 分离菌株的形态结构与培养培养特性33-34
2.2 血清学实验结果34-35
2.3 生化实验结果35-36
2.4 药物敏感性实验结果36-37
2.5 分离株16SrRNA基因PCR扩增结果及测序结果分析37-40
2.6 分离菌的动物实验结果40-43 3 讨论43-44 参考文献44-45第三章 兔支气管败血波氏杆菌PCR方法的建立45-61 摘要45-46 1 材料与方法46-50
1.1 菌种46
1.2 主要试剂46
1.3 主要仪器与设备46
1.4 方法46-50 2 结果与分析50-58
2.1 PCR扩增FHA基因片段结果50-51
2.2 重组质粒T-FHA的PCR鉴定51-52
2.3 序列测定及同源性分析52-54
2.4 PCR条件优化结果分析54-56
2.5 PCR特异性实验结果分析56-57
2.6 PCR敏感性实验结果分析57-58 3 讨论58-60 参考文献60-61第四章 PCR方法在临床上的应用61-71 摘要61 1 材料和方法61-64
1.1 实验菌株61-62
1.2 培养基及主要试剂62
1.3 引物62
1.4 主要仪器与设备62-63
1.5 方法63-64 2 结果与分析64-67
2.1 血清学诊断结果64
2.2 PCR方法诊断结果64-67
2.3 常规血清学检测与PCR检测的对比67 3 讨论67-69 参考文献69-71全文总结71-73致谢73
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【参考文献】
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【二级参考文献】
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作 用 机 制 与核糖体30S亚基的A位特异性结合，阻止氨基酰tRNA进入A位，阻碍肽链延长和蛋白质的合成；同时改变细菌细胞膜的通透性，使胞内的核苷酸及其他重要成分外漏，从而抑制DNA的复制 [抗菌谱]广谱抑菌 G+菌＞G-菌，G+菌不如青霉素类、头孢类；G-菌不如氨基糖苷类 G+菌：链球菌、肺炎球菌、部分葡萄球、炭疽、 破伤风、产气杆菌 G-菌：脑膜炎球、大肠杆、痢疾杆、肺炎杆、流 感杆、布氏杆 四体：支、衣、立克次体、螺旋体 某些原虫：阿米巴 无效：绿脓、伤寒、结核、真菌、病毒 四环素（Tetracycline）
[体内过程]
1、吸收:不完全,一些因素可影响其吸收 如：多价阳离子、食物、抗酸药
2、分布:1）广泛 2）胆汁中浓度是血药浓度10-20倍 3）沉淀在生长期的骨骼和牙齿中
3、排泄:主要以原形从肾脏排泄 [临床应用]
1、立克次体感染―首选
支原体感染-首选四环素类或大环内酯类
衣原体、螺旋体-首选四环素类或青霉素类 2、对G+、G-感染不再首选
3、鼠疫、布鲁菌病、腹股沟肉芽肿等
首选多西环素 [不良反应] 1、胃肠道刺激 2、二重感染（真菌感染、伪膜性肠炎）
长期应用广谱抗生素，使敏感菌受抑制，不敏感菌乘机大量繁殖，由劣势变为优势，造成新的感染 3、对骨骼和牙齿生长的影响，形成四环素牙
4、其他：肝、肾毒性；过敏反应 多西环素（强力环素 doxycycline）
特点：1、抗菌谱同四环素，抗菌作用大于四环素2-10倍, 对四环素耐药的金葡菌有效 强效、速效、长效 2、吸收快，完全，但仍受阳离子、食物的影响 3、有明显的肝肠循坏 4、胃肠道反应多见 米 诺 环 素
特点：1、长效，高效，抗菌活性最强 2、口服吸收完全，且不受食物的影响 3、分布广，排泄慢 4、抗菌谱与四
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320例药源性双硫仑样反应的分析
优质期刊推荐[转载]药物与营养
药物与营养
广州市妇女儿童医疗中心
临床营养专科& 刘喜红
药物进入人体后，一方面可不同程度地影响营养素的摄入、吸收、代谢与排泄，使营养价值发生改变；另一方面，食物及营养素也可对药物吸收、分布、代谢和排泄产生一定的影响，使药物的药效和不良反应增加或减弱。
这种药物与营养素在体内彼此发生药动学和药效学变化的作用，或药物引起营养状况改变的现象，称为药物－营养素相互作用（drug-nutrient
interactions）。
【药物与营养素的相互作用】
1．药物与营养素相互作用多表现为2种形式：
①一开始即表现为急性反应；
②经过多年的发展才出现临床症状。
2．药物与食物及营养素相互作用的机制：
可分为药动学和药效学作用。
药动学：食物影响药物的吸收、分布、代谢或排泄所致。
药效学：食物或其衍生物在受体水平影响药物的作用造成。
3．影响营养素－药物的因素：影响药物与营养素相互作用中最重要的两个因素是机体因素及药物、营养素方面的因素。
①机体自身因素：包括年龄、营养状况及体型、遗传因素、生活方式、疾病因素。如营养不良和肥胖均会放大患者对药物和营养素的作用。
②膳食与药物特性；同一类药物不同药品或同一药物不同剂型可具有不同的现化性质，从而产生不同的相互作用。
4．药物或营养素的吸收、代谢、分布、排泄以及它们的临床、生理结果都会因二者的相互作用而发生改变。因此，可以彼此改变的疗效，甚至引起机体营养状况的下降。
5．在体外的变化：营养素与药物的相互作用主要发生在两者的直接物理接触过程中，例如在营养液的配制过程中、输液袋中以及液体的输注系统中。
6．相互作用的表现形式主要有：水解过程，如肠内营养制剂与某些口服液体药物混合时；物理不相容性，如静脉给药与静脉营养掺合剂之间；静脉输注脂肪乳剂中加入药物引起脂肪乳剂的分解等。
【用药对营养代谢的影响】
1、影响食欲：
有明显抑制食物摄取的药物，如治疗儿童多动症的苯丙胺、哌醋甲酯(利他林)，可使儿童食欲不振，纳食呆滞而使营养摄入下降。
抗肿瘤药亚硝脲类、氮芥类可引起患者严重恶心、呕吐、厌食。
红霉素、洁霉素等抗生素也有明显抑制食欲作用。
甚至某些中草药如白垩、石膏、知母、大黄、黄柏、黄芩苦寒败胃，熟地黄滋腻碍胃，都可抑制食欲。
而有些药物长期服用可刺激食欲，增加食物摄入量，如抗组胺药、精神药物可阻断组胺H1受体、多巴胺D2受体或激动5=-羟色胺1A受体等而增加食欲。
另外，类固醇激素、胰岛素、甲状腺激素等药物则通过改变机体代谢水平增加食欲。
2、影响营养素的吸收：
① 某些药物能增加食物和营养素的吸收，并对患者营养状况有利。如抗胃酸分泌药西咪替丁，可改善蛋白质与糖类的吸收。
有些药物可减少营养素的吸收，引起营养素吸收障碍甚至营养不良。如口服避孕药对多种维生素的吸收和代谢都会产生影响，可引起叶酸吸收率下降，维生素B2需要量增加，维生素C破坏产加，同时对微量元素铜、镁、锌的吸收也有影响。
强的松、地塞米松等皮质激素会增加维生素C、B6、D的需要量，并导致钙转运障碍。&&
3、影响营养素的合成和利用：
有些药因干扰体内营养物质的生物合成和利用而导致营养不良。
四环素类、大环内酯类、磺胺类抗生素：抑制肠道菌群→VitK合成减少→VitK缺乏。
保泰松、水杨酸盐类、消炎痛也能引起维生素K缺乏。
激素：包括地塞米松、强的松等，可导致蛋白质合成减少，促使蛋白质转变成糖元，减少组织对葡萄糖的利用和肾小管对葡萄糖的重吸收，使患者的糖耐量和体内利用葡萄糖下降。
口服避孕药：不利于体内对葡萄糖的贮存，还能影响烟酸和蛋白质在体内的合成。另外，还可影响叶酸的生物利用。
L-门冬酰酶对人体蛋白质合成有干扰作用。
乙胺嘧啶、甲氧苄氨嘧啶、氨甲喋呤、苯妥英钠、苯巴比妥、扑癫酮等可拮抗叶酸的吸收和利用，增加在体内的转换和代谢。&&
4、影响营养素代谢：
药物可抑制维生素转变为相应的辅酶、干扰维生素的生理功能或竞争维生素受体而引起维生素缺乏。如孕期服用苯巴比妥可致胎儿维生素K缺乏。
抗惊厥药物可使维生素D与叶酸代谢加速，导致叶酸缺乏。
5、影响营养素排泄：
利尿剂：增加钾、锰、锌、维生素B1等的排出。
香豆素类抗凝血药：包括华法林、双香豆素、醋硝豆素等可拮抗VitK，导致VitK缺乏。
液体石蜡：溶解脂溶性物质如脂肪和维生素A、D、K、胡萝卜素，导致这些维生素从粪便中排出增加，从而引起相应营养素的缺乏。
&&&&&&&&&&
【食物及营养素对药物的影响】
2、影响药物代谢：
食物对药物代谢的影响主要通过影响肝药酶的活性而起作用。
高蛋白低碳水化合物食物可加速肝脏药物代谢，而低蛋白高碳水化合物饮食则降低肝脏药物代谢能力；缺乏维生素E可抑制药酶系统中有效成分的合成；缺乏锌和镁可使细胞色素P450减少。
膳食纤维可抑制肝微粒体氧化酶系统，并通过改变肠道菌群而间接影响药物的代谢。
饮用葡萄柚汁可以明显抑制肝脏和肠壁CYP 450
3A4的成分，从而增加尼莫地平、非洛地平等降压药的不良反应，造成低血压。&&
VitE可以减少体内过多活性氧的毒性，因此早产儿氧疗发生呼吸困难时，可用VitE保护。
另外，个人生活习惯如吸烟、饮酒等对很多药物代谢有影响。烟碱对普萘洛尔、安替比林、茶碱、氯丙嗪、氟派啶醇、氯氮平、地西泮、厄洛替尼等药物有酶促作用。
乙醇对肝药酶有双相作用，大剂量时可抑制酶活性，少量则起诱导作用。使用苯妥英钠治疗癫痫的患者饮酒，可诱发癫痫发作。
大量维生素A能破坏可的松类药物的抗炎或抗过敏作用。
维生素B6可促使左旋多巴脱羧形成多巴胺而降低疗效，故使用左旋多巴治疗时应避免使用维生素B6。
3、影响药物排泄：
膳食影响尿液酸碱性，从而影响药物的排泄。酸性尿液可延长酸性药物在体内的作用并延缓其排泄；碱性尿液则延长碱性药物的排泄时间，增强药效或不良反应。
服用奎尼丁时橘子、喝葡萄汁，如同时服抗酸药，可导致中毒。
糖皮质激素类药物具有保钠排钾作用，用药时要求低盐饮食，并给予绿色蔬菜、香蕉、桔子、果汁等补钾。
服用保钾利尿剂螺内酯时，要停用含钾高的食物，以免血钾过高。&&&&&&&&&&&&&&&&&&
4、食物在受体水平影响药效：
富含维生素K的食物如动物肝脏、花茎甘蓝、芽甘蓝、菠菜、唐莴苣、芫荽叶等，对华法林有直接拮抗作用而影响其抗凝效果。
富含组氨酸的食物（鱼虾、奶酪、肉制品等）可在体内转化为组织胺，如与氯苯那敏、苯海拉明、异丙嗪等组胺受体拮抗药合用，可造成组胺蓄积，诱发头晕、头痛、心慌等不适。
茶叶中含有咖啡因和茶碱，可与镇静药巴比妥、地西泮等拮抗中枢神经抑制作用；降低双嘧达莫的扩冠状血管的作用。
黑木耳减少血小板凝聚作用，而减弱维生素K的凝血作用。
【药物与营养素或食物的特殊相互作用】
1、酪胺反应：奶酪、葡萄酒、扁豆等食物中富含酪胺，可刺激交感神经系统，使血压升高。吃含酪胺的食物或饮酒同时又服用单胺氧化酶抑制剂，可导致酪胺的蓄积，出现头痛、幻觉、呕吐、面色潮红等症状，严重时可出现高血压危象，脑血管破裂死亡。
常见的导致酪胺反应的单胺氧化酶抑制剂有利奈唑酮、呋喃唑酮、异烟肼、司来吉兰、奋乃静、吗氯贝胺等。出现症状的严重程度与药物剂量及摄入的酪胺量成正比。&&&&&&&&&&&&&&&&&&
提醒：用药期间至用药后1周内不得饮酒或含酒精的药品。
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