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下调NDRG1表达对胰腺癌细胞增殖_转移及侵袭的影响
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下调TSG101基因表达对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响
优质期刊推荐上调miR-148a表达对胰腺癌AsPC-1细胞DNMT1基因表达及细胞增殖和凋亡的影响--《南昌大学》2012年硕士论文
上调miR-148a表达对胰腺癌AsPC-1细胞DNMT1基因表达及细胞增殖和凋亡的影响
【摘要】：目的：探讨上调microRNA-148a(miR-148a)表达对胰腺癌细胞系AsPC-1的DNA甲基转移酶1基因(DNMT1)表达及其增殖和凋亡的影响，为胰腺癌的基因治疗奠定一定的实验基础。
方法：利用体外已构建好的miR-148a表达质粒pcDNA3.1/pri-miR-148a转染胰腺癌AsPC-1细胞，建立稳定表达该质粒的细胞系。实验分三组：空白对照组（未转染），阴性对照组（转染pcDNA3.1），实验组（转染pcDNA3.1/pri-miR-148a）。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR)和Western Blot法分别检测转染前后AsPC-1细胞中DNMT1mRNA和蛋白表达的变化；MTT法检测细胞生长状况；利用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡的变化。
结果：转染miRNA的表达质粒在胰腺癌AsPC-1细胞中稳定表达miR-148a后，与空白对照组和阴性对照组相比，实验组DNMT1mRNA相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组，差异具有统计学意义（0.9VS1.3VS1.0，均P0.05）；实验组DNMT1蛋白表达明显下调，P0.05；细胞增殖受到抑制，第五天细胞增殖抑制率达24.7%；细胞在G0/G1期的细胞比率高达72.5%，高于空白对照组和阴性对照组中AsPC-1细胞在G0/G1期的比率（分别为63.24%和63.42%）（p0.05）；细胞凋亡明显增多，实验组凋亡率是空白对照组的4.32倍（p0.05）。
结论：表达miR-148a的质粒pcDNA3.1/pri-miR-148a转染胰腺癌AsPC-1细胞后能下调DNMT1基因mRNA和蛋白表达水平，并抑制该细胞的增殖，促进细胞凋亡。miR-148a有可能成为治疗胰腺癌的靶基因。
【关键词】：
【学位授予单位】：南昌大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2012【分类号】：R735.9【目录】：
摘要3-4ABSTRACT4-8中英文对照8-10第1章 前言10-12第2章 材料与方法12-19 2.1 试剂与材料12-13
2.1.1 主要试剂12-13
2.1.2 细胞与载体13
2.1.3 主要仪器13 2.2 实验方法及操作流程13-18
2.2.1 pcDNA3.1/pri-miR-148a 基因表达载体构建方法、步骤见参考文献13
2.2.2 AsPC-1 细胞培养13
2.2.3 AsPC-1 细胞的转染13-14
2.2.4 AsPC-1 细胞的 RNA 提取14
2.2.5 利用 RT 反应及实时荧光定量 PCR 检测 DNMT1mRNA 的变化14-16
2.2.6 Western Blotting 检测 pri-miR-148a 对 DNMT1 的影响16-17
2.2.7 MTT 法检测细胞的增殖活性17
2.2.8 流式细胞仪检测细胞周期17
2.2.9 流式细胞仪检测细胞凋亡17-18 2.3 资料分析和数据处理18-19第3章 实验结果19-25 3.1 样本细胞总 RNA 提取及质量鉴定结果19 3.2 实时荧光定量 PCR 检测 DNMTl 基因 mRNA 表达水平的变化19-20 3.3 Western Blotting 检测 pri-miR-148a 对 DNMT1 蛋白的影响20-21 3.4 MTT 法检测细胞的增殖活性21-22 3.5 DNMT1 基因表达抑制后对细胞周期的影响22-23 3.6 流式细胞仪检测凋亡结果分析23-25第4章 讨论25-31第5章 结论与展望31-32 5.1 结论31 5.2 展望31-32致谢32-33参考文献33-36攻读学位期间的研究成果36-37综述37-42 参考文献41-42
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京公网安备74号雾霾环境中的致癌因子可能通过改变正常细胞中遗传物质的结构或功能使其变为癌细胞．年老体衰的人细胞发生癌变后，癌细胞特别容易冲破细胞识别作用，逃避机体的免疫监视．请根据上述材料完成下列问题：（1）老人易患癌症原因可能是____能力降低，导致机体无法识别并杀死癌变细胞．（2）环境中的致癌因子会改变正常细胞中的遗传物质，而使其产生变异，变异的来源可能是____．亲代这些变异会通过____细胞遗传给后代．（3）癌细胞的特点之一是在适宜的条件下，能够无限增殖．从该特点看，致癌因子改变的基因是____．癌细胞的特点之二是具有扩散性，原因是____．（4）蜂毒素是工蜂毒腺分泌的多肽，研究发现，蜂毒素对多种癌细胞具有强烈的杀伤作用．阻断癌细胞增殖周期可引起细胞凋亡，科研人员为研究蜂毒素对人肺癌细胞的影响及作用机制，进行了以下实验，请回答问题①方法步骤a．取4只相同的培养瓶编号，分别加入等量的完全培养液并接种等量离体肺癌细胞．b．1号培养瓶为空白对照，向2、3、4号培养瓶中分别加入等量的2、4、6μg/mL蜂毒素溶液．c．培养48小时后，检测并统计肺癌细胞的凋亡率，结果如图1所示．d．重复a、b步骤，检测凋亡基因（Bax、Bel-2）的表达，结果如图2所示．②分析讨论：a．图l表明：____．b．图l、图2表明：从基因水平上看，蜂毒素诱导肺癌细胞凋亡与____有关．当Bel-2蛋白/Bax蛋白的比值出现____趋势时，将会诱导肺癌细胞凋亡．-乐乐课堂
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雾霾环境中的致癌因子可能通过改变正常细胞中遗传物质的结构或功能使其变为癌细胞．年老体衰的人细胞发生癌变后，癌细胞特别容易冲破细胞识别作用，逃避机体的免疫监视．请根据上述材料完成下列问题：（1）老人易患癌症原因可能是细胞免疫&能力降低，导致机体无法识别并杀死癌变细胞．（2）环境中的致癌因子会改变正常细胞中的遗传物质，而使其产生变异，变异的来源可能是基因突变、染色体变异&．亲代这些变异会通过生殖（精子和卵）&细胞遗传给后代．（3）癌细胞的特点之一是在适宜的条件下，能够无限增殖．从该特点看，致癌因子改变的基因是原癌基因和抑癌基因&．癌细胞的特点之二是具有扩散性，原因是癌细胞表面的糖蛋白减少，从而使癌细胞之间的黏性降低&．（4）蜂毒素是工蜂毒腺分泌的多肽，研究发现，蜂毒素对多种癌细胞具有强烈的杀伤作用．阻断癌细胞增殖周期可引起细胞凋亡，科研人员为研究蜂毒素对人肺癌细胞的影响及作用机制，进行了以下实验，请回答问题①方法步骤a．取4只相同的培养瓶编号，分别加入等量的完全培养液并接种等量离体肺癌细胞．b．1号培养瓶为空白对照，向2、3、4号培养瓶中分别加入等量的2、4、6&μg/mL蜂毒素溶液．c．培养48小时后，检测并统计肺癌细胞的凋亡率，结果如图1所示．d．重复a、b步骤，检测凋亡基因（Bax、Bel-2）的表达，结果如图2所示．②分析讨论：a．图l表明：一定浓度的蜂毒素能诱导肺癌细胞凋亡，并随浓度增大诱导效应增强&．b．图l、图2表明：从基因水平上看，蜂毒素诱导肺癌细胞凋亡与Bax基因表达增强和Bel-2基因表达减弱&有关．当Bel-2蛋白/Bax蛋白的比值出现降低&趋势时，将会诱导肺癌细胞凋亡．
本题难度：一般
题型：填空题&|&来源：2014-烟台三模
分析与解答
习题“雾霾环境中的致癌因子可能通过改变正常细胞中遗传物质的结构或功能使其变为癌细胞．年老体衰的人细胞发生癌变后，癌细胞特别容易冲破细胞识别作用，逃避机体的免疫监视．请根据上述材料完成下列问题：（1）老人易患癌症原因可...”的分析与解答如下所示：
本题是对免疫系统的监控和清除功能、细胞癌变的机理和癌细胞的特点、癌细胞防治的综合性考查，回忆免疫系统的监控和清除功能、细胞癌变的机理和癌细胞的特点解答（1）、（2）、（3）；分析图1和图2中蜂毒素浓度与肺癌细胞凋亡率、蜂毒素浓度与Bax基因Bel-2基因表达率之间的关系，进行推理解答（4）．
解；（1）老人由于免疫功能下降，免疫系统对癌细胞的监控和清除功能降低因此容易患癌病，免疫系统对癌细胞的监控和清除功能属于细胞免疫．（2）致癌因子引起的可遗传变异的来源是基因突变和染色体变异；亲代的这些可遗传变异有可能通过生殖细胞传递给子代．（3）细胞癌变的机理是在致癌因子的作用下，原癌基因和抑癌基因发生突变进而导致细胞癌变，癌变的细胞膜表面的糖蛋白减少，细胞间的黏着性降低，容易分散和转移．（4）分析题图可知，随蜂毒素浓度升高，肺癌细胞凋亡率升高，由此可以说明一定浓度的蜂毒素能诱导肺癌细胞凋亡，并随浓度增大诱导效应增强；分析图2可知，在一定的范围内，随蜂毒素浓度升高，Bel-2基因表达率下降，Bax基因表达率增强，综合图1和图2可以推断：从基因水平上看，蜂毒素诱导肺癌细胞凋亡与Bax基因表达增强和Bel-2基因表达减弱有关．当Bel-2蛋白/Bax蛋白的比值出现下降趋势时，将会诱导肺癌细胞凋亡．故答案为：（1）细胞免疫（2）基因突变、染色体变异&& &生殖（精子和卵）（3）原癌基因和抑癌基因　&癌细胞表面的糖蛋白减少，从而使癌细胞之间的黏性降低（4）a．一定浓度的蜂毒素能诱导肺癌细胞凋亡，并随浓度增大诱导效应增强&&b．Bax基因表达增强和Bel-2基因表达减弱（Bax基因和Bel-2基因表达）&&降低
对于对免疫系统的监控和清除功能、细胞癌变的机理和癌细胞的特点、癌细胞防治的综合理解应用，把握知识点间的内在联系是解题的关键．
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雾霾环境中的致癌因子可能通过改变正常细胞中遗传物质的结构或功能使其变为癌细胞．年老体衰的人细胞发生癌变后，癌细胞特别容易冲破细胞识别作用，逃避机体的免疫监视．请根据上述材料完成下列问题：（1）老人易患...
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