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三种乳腺癌微环境中浸润淋巴细胞和细胞因子的深入研究.pdf65页
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天津医科大学
硕士学位论文
三种乳腺癌微环境中浸润淋巴细胞和细胞因子的深入研究
姓名：徐新生
申请学位级别：硕士
专业：病理学与病理生理学
指导教师：付丽
天津医科大学硕士学位论文
乳腺浸润性微乳头状癌 invasive
carcinoma，IMPC
mieropapillary
是一种高淋巴管侵犯、高淋巴结转移的特殊类型乳腺癌。非特殊型浸润性导管
癌 invasivecarcinoma,not
类型，其预后依组织学分级等存在个体差异。髓样癌 medullarycarcinoma，MC
是细胞高度异性伴大量淋巴细胞浸润，但预后相对较好的一种特殊类型乳腺癌。
lymphocyt锱，TILs 进行对比性研究，从肿瘤微环境中淋巴细胞浸润的异同和
淋巴细胞因子的表达差异角度探讨不同类型乳腺癌预后存在差异的原因。
27例MC微环境中浸润T淋巴细胞亚群分布以及111细胞因子 IL．2，球N吖，
组织学分级和淋巴结转移等主要病理学特征的关系。
【结果】1．三种乳腺癌微环境中浸润的淋巴细胞数量都是以T淋巴细胞为主，
而IDC-NOS则以CD4+T细胞为主 P 0．ooo ；2．IL-2表达在IMPC组最低，
统计学意义 P--0．526 。玎烈吖的表达也是类似于IL-2，也是在IMPC组最低，
和MC之间差异没有明显统计学意义 P卸．220 ；IL-IO的表达在三种乳腺癌中
P -0．041 。MC组四种Th细胞因子表达与以上主要病理学特征均没有明显关
【结论】1-不同病理组织
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(请教)检测细胞培养上清中的细胞因子
(请教)检测细胞培养上清中的细胞因子
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这个帖子发布于10年零147天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我想用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中的细胞因子的浓度，也就是细胞刺激培养之后取上清检测。请问，在细胞培养板上一般每孔用多少细胞？加多少营养液？我担心浓度太低检测不出来。请做过的同仁们多多指教，最好详细点说明哦，谢谢！
野原 edited on
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Precautions should be taken to such kind of experiment:1. you'd better use serum-free media because bovine serum always contains different kind of cytokines.2. on average, the amount of 1-9x107 of cells is enough for elisa screen. 3. the amount of media depends on your cell walls volume.
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Vetmed，真是太谢谢你了。但是，我还有疑问，请继续指点，谢谢啦。1。我可以先用含牛血清的培养液使细胞贴壁，待细胞贴壁之后再用无血清的营养液培养，同时加刺激剂，24h之后收取上清检测细胞因子的水平。不过，即使用含有血清的培养液培养也应该不会影响吧，因为我还有对照啊，试验组减去对照组不就消除了误差吗？不知我这样想有无遗漏，请指教。2。我恐怕达不到1-9x107 的细胞数，因为细胞数有限，我同时还要检测mRNA的表达，一般每组用5×106的细胞就可以了。我看国外的文献有用24孔板，每孔1×106细胞，加3ml营养液。我担心的问题就在这，因为ELISA检测试剂盒很贵，我不可能大量摸索试验条件。万一培养上清的浓度不合适，我检测不出来，岂不白白花钱了？我现在查到两种试剂盒，一种是原装进口，当然很贵。另一种是进口分装的试剂盒，要便宜很多，不知效果如何，大家有什么好的建议吗？Vetman，非常渴望与您继续交流，能留下您的Email吗？可以发pm给我。
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另一问题至今无人回答，请vetman帮忙看一下。谢谢。我想检测肺泡巨噬细胞受到病毒刺激后分泌NO和活性氧的变化。有几个问题想请教大家，请不吝赐教！1。若做体外试验，我想取病毒刺激后的细胞培养上清来检测NO和活性氧的水平。但是，如果先用病毒感染试验动物后，于不同时间灌肺获取肺泡巨噬细胞，那么应该取什么材料检测？是取肺灌洗液还是取肺泡巨噬细胞体外再培养的上清？2。同理，如果检测细胞因子的生物活性是取肺灌洗液还是取肺泡巨噬细胞体外再培养的上清？
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as for cytokines screen, I strongly recommend to use serum free media, surely, you can use serum containing media before you activate them with stimuli. As you know, serum sometimes can contain more cytokine even than that produced by cells with stimuli, if so, this will overlap your results. Our protocol is to replace containing serum with free one the day before stimulation, overnight is okay. In terms of amount of cells, to use as much as possible cells, but to rember that the cell status should be good!I believe that commerical kits can reach the sensitivity of 1ng of cytokines, you can check some other guys papers to see if your cells can secret such amount of cytokines with your specific stimuli. as for your other experiment with macrophages in the lung, I prefer in vitro culturing cells. This is the routinal way for detecting cytokines or radical chemicals level. Safely, you'd better checking some protocols other guys performed successfully.you can add me to MSN: . Good luck with your research!
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vetmad，我不用MSN，按你的地址给你发了封信并且PM给你，不知你收到没有。方便时请回复，谢啦！
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今天刚用ELISA测的巨噬细胞分泌的TNF-a，效果还不错。就像VETMED说的一定要用无血清培养基刺激巨噬细胞，避免血清干扰。另外我用的是6孔板培养的，铺的细胞数较多用1.5mL无血清培养基孵育。下次想试试24孔看哪个效果好些。
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