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人类风湿因子检测(RF)ELISA试剂盒样品采集：&收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，&将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。血浆：&应根据试剂盒的要求选择&EDTA&、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入&10&％抗凝剂&(&0.1M&柠檬酸钠或&1%&heparin&或&2.0%EDTA.Na2)&混合&10-20&分钟后，离心&20&分钟左右(&&转&/&分)。仔细收集上清。如有沉淀形&成，应再次离心。血清：&室温血液自然凝固&10-20&分钟后，离心&20&分钟左右(&&转&/&分)。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。组织标本：&切割标本后，称取重量。加入一定量的&PBS&，缓冲液中可加入&1&μ&g/L&蛋白酶抑制剂或&50U/ml&的&Aprotinin&(&抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀&浆充分。离心&20&分钟左右(&&转&/&分)。仔细收集上清置于&-20&度或&-&70&度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。&分装后一份待检测，其余冷冻备用。 人类风湿因子检测(RF)ELISA试剂盒样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。人类风湿因子检测(RF)ELISA试剂盒注意事项：1．& 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．& 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．& 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．& 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．& 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．& 底物请避光保存。7．& 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．& 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．& 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。人类风湿因子检测(RF)ELISA试剂盒更多热销产品推荐：人抗心磷脂抗体(ACA)ELISA试剂盒人抗心磷脂抗体IgA(ACA IgA)ELISA试剂盒人抗心磷脂抗体IgG(ACA IgG)ELISA试剂盒人抗心磷脂抗体IgM(ACA IgM)ELISA试剂盒人抗心磷脂抗体检测条(ACAStrip)ELISA试剂盒人抗中性粒胞浆抗体(cANCA)ELISA试剂盒人抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCAformalinfixed)ELISA试剂盒人抗组蛋白抗体(Histone)ELISA试剂盒人类风湿因子检测(RF)ELISA试剂盒人类风湿因子IgG/IgA/IgM(RF IgG/IgA/IgM)ELISA试剂盒人类风湿因子IgM(RF IgM)ELISA试剂盒NADP苹果酸酶（NADP-ME）测试盒紫外分光光度法50管/48样NAD-苹果酸酶（NAD-ME）测试盒紫外分光光度法50管/48样6-磷酸葡糖糖酸脱氢酶（6PGDH）测试盒紫外分光光度法50管/48样肌酸激酶测试盒紫外分光光度法50管/48样脂肪酸合成酶（FAS）测试盒紫外分光光度法10管/9样脂肪酸合成酶（FAS）测试盒紫外分光光度法25管/24样脂肪酸合成酶（FAS）测试盒紫外分光光度法50管/48样蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒紫外分光光度法50管/48样硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）测试盒可见分光光度法50管/48样谷胱甘肽还原酶（GR）测试盒紫外分光光度法50管/48样
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生产厂商名称（中文）&
产品性能结构及组成 【主要组成成份】R1.RF分析缓冲液:氨基乙酸,氯化钠,EDTA钠,牛血清白蛋白,叠氮化钠；R2. RF乳胶试剂:氨基乙酸,氯化钠,吸附了人类IgG的乳胶粒子,叠氮化钠。产品有效期：2℃-8℃保存，有效期15个月。附件：注册产品标准，产品说明书。
产品适用范围 体外定量测定人血清中的类风湿因子(RF)。
注册代理 兰德克斯诊断器材(昆山)有限公司
售后服务机构&
有效期截止日
生产厂商名称（英文） Randox Laboratories Ltd
生产厂地址（中文） Ardmore,Diamond Road,Crumlin,Co.Antrim,United Kingdom,BT29 4QY
生产场所 Ardmore,Diamond Road,Crumlin,Co.Antrim,United Kingdom,BT29 4QY
生产国（中文） 英国
产品名称（中文） 类风湿因子检测试剂盒(乳胶增强免疫比浊法)
产品名称（英文） RHEUMATOID FACTOR
规格型号 RFx15R2:1x10ml)
产品标准 YZB/ENG
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<meta name="baidu-tc-verification" content="85dbceea6dc3cEDTA―K2抗凝剂导致血小板假性减少
日期:来源:未知作者:本站综合编辑 点击:次
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　　[摘要]& EDTA-K2具有对红、白细胞形态影响极小，并可抑制血小板在体外的聚集等优点，目前临床已广泛应用乙二胺四乙酸二钾(EDTA&K2)抗凝剂进行血细胞计数，但引起血小板不正常的粘附、聚集，导致抗凝静脉血血小板结果假性减少，导致对检验结果的错误理解、极易误诊，而且使患者承受不必要的进一步检查，增加了患者的医疗费用及痛苦，应引起同行们的注意。
　　[关键词]& 血小板；抗凝剂；血小板计数；血小板假性减少
　　将乙二胺四乙酸二钾(EDTA&K2)作为血细胞计数的抗凝剂，临床已用多年。最近我们在血常规检验中发现1例由EDTA&K2抗凝剂引起血小板假性减少的典型病例。现介绍如下。
　　1& 病例资料
　　患者女性，49岁，曾于15年前行阑尾根除术，2008年7月起腹部不适，时常月经量过多；2009年6月因月经量过多来院就诊。实验室检查：①无肝、脾、淋巴结肿大，无出血点及瘀斑；②心电正常；③超声：宫体增大，宫区可见多个低回声结节，较大者大小约5.5cm&5.3cm,边界尚清，周边可见血流，子宫内膜不厚，子宫多发肌瘤。④血常规：白细胞(WBC)4.42&109／L、血红蛋白(Hb)108g/L、血小板(PLT)15&109／L；妇科要求复查血小板。我科临检室用COULTER-HNX血细胞分析仪对该患EDTA&K2抗凝的真空采血管采集德静脉血，进行细胞计数，结果PLT17&109／L，以上试验均按仪器使用说明书及全国《检验操作规程》第三版要求进行，排除抽血和实验中的操作误差、仪器故障。诊断：①子宫多发肌瘤；②血小板偏低，入院择期手术治疗。
　　入院后请血液科会诊，并查①凝血酶原时间(PT)10.0s、活化部分凝血酶时间(APTT)22.9s、凝血酶时间1.6s(TT)、纤维蛋白原(Fbg)2.4g/L、D-二聚体(D&Dimer)0.244mg／L；②网织红细胞(RC)1.5%、血涂片中血小板呈&卫星现象&；③骨穿结果显示：骨髓增生活跃，粒红两系比例及形态未见异常，巨核系全片共见巨核69个，分类25个，其中幼稚巨核2个，颗粒巨核20个，产板巨核2个，裸核1个，血小板散在及成堆易见；④免疫：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、梅毒检测(RPR)、艾滋病毒检测(HIV)、抗链-ASO、类风湿因子、C反应蛋白(12RP)、抗核抗体(ANA)、核抗原抗体(ENA)均为阴性；红细胞沉降率(ESR)均正常；甲状腺系列均正常。⑤肿瘤标记物：癌胚抗原(CEA)、癌相关抗原CAl53正常；⑥狼疮细胞(-)。
　　2& 治疗方案
　　为提升血小板输同血型血小板8个单位，静点过甲强龙、丙种球蛋白和重组人血小板生成素(特比奥)等。但血小板均无起色。
　　3& 实验室建议
　　在此种情况下我科临检室建义改用枸橼酸钠抗凝剂为该患者检查血常规为PLT264&109／L;按全国《检验操作规程》第三版要求进行草酸胺法人工计数PLT254&109／L。后多次用枸橼酸钠凝剂或人工计数查血常规，血小板均在(223～286)&109／L范围内。
　　4& 讨论
　　临床上引起血小板偏低原因很多，该患者入院后经血液科会诊及检查结果显示凝血系列正常除外弥散性血管内凝血(DIC)引起消耗性血小板降低性疾病；肝脾未及、网织红细胞、骨穿结果显示无骨髓异常增生综合征(MDs)、白血病、再生障碍性贫血、脾功能亢进、血小板减少性紫癜(IPT)、自身免疫溶血性贫血伴血小板减少(Evans综合征)等存在；乙肝、梅毒、艾滋；抗链-ASO、类风湿因子、C反应蛋白(CRP)、抗核抗体(ANA)、红细胞沉降率(ESR)、狼疮细胞、甲状腺系列正常均排出上述原因引起血小板减少。
　　该患者血涂片瑞氏染色后发现&血小板卫星现象&是引起血小板技术减少直接原因。&血小板卫星现象&是偶见于EDTA-K2抗凝血中，血小板黏附、围绕于中性粒细胞(或偶尔黏附于单核细胞)的现象，系EDTA和白细胞表面的IgG或Fc片段相互作用、非特异性结合血小板表面的GPⅡb/Ⅲs所致，虽与疾病和药物无关，这些粘附、围绕于中性粒细胞的血小板被误计为白细胞，造成血小板假性减少[4]，由于&血小板卫星现象&造成血小板计数减少，可采取草酸胺法血小板计数纠正，有文献报道用橘掾酸盐抗凝可消除此现象[5]。
　　由于EDTA对血细胞和血小板计数影响很小，抑制血小板在体外聚集，使血小板均匀呈单个颗粒悬浮于血液中，血细胞计数仪是根据血小板的体积大小、通过微孔时产生的脉冲数计数的，当血小板聚集成较大颗粒时，仪器只识别颗粒大小而不能去辨别颗粒性质，致使多个血小板被当成单个计数，或被误认为小红细胞而不纳入血小板计数范围，使血小板计数减低。也有学者曾报道EDTA依赖性假性PLT减少(EDTA-dependent pseudothrombocytopenia,EDTA-PTCP)。在此提醒临床实验室同行们一旦临床发现此类事件应作以下检查：①末梢血涂片观察血小板分布及形态；②草酸胺法人工计数；③改换抗凝剂进行血细胞计数。避免此类事件减少患者承受不必要的进一步检查，减少患者不必要的医疗费用及痛苦。
[1] 窦心灵,何贵山,朱建敏,等.EDTA&K2抗凝剂导致血小板假性减少l例报道[J].中国实验诊断学,):77.
[2] 涂传清,吴建曾,赵锦,等.EDTA依赖性假性血小板减少症l例[J].临床血液学杂志,):246-247.
[3] 熊立凡,刘成玉.临床检验基础[M].4版.北京:人民卫生出版社,2007: 69.
[4] 周小棉,邹晓.假性血小板症研究进展[J].中华检验医学杂志,):1065.
[5] 迟林.血细胞分析仪检测血小板假性减低2例[J].中华现代临床医学杂志,B).
(责任编辑：竹)
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犬类风湿因子(RF)elisa试剂盒说明书
犬类风湿因子(RF)elisa试剂盒说明书
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大鼠类风湿因子（RF）酶联免疫试剂盒本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大鼠类风湿因子（RF） ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠类风湿因子（RF）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠类风湿因子（RF）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1.& 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2.& 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3.& 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4.& 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5.& 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.& 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2.& 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3.& 标准品稀释液即可视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取10&L加样即可。4.& 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5.& 所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：482412631.5 IU/mL 试剂的准备&20&洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20&洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1.& 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2.& 自动洗板机：每孔注入洗液350&L，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1.& 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2.& 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50&L；3.& 待测样本孔先加待测样本10&L，再加样本稀释液40&L；4.& 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100&L，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5.& 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6.& 每孔加入底物A、B各50&L，37℃避光孵育15min。7.& 每孔加入终止液50&L，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断&绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。试剂盒性能1. &准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. &灵敏度：最低检测浓度小于1.0 IU/mL。3. &特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. &重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. &贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. &有效期：6个月免责声明1. &&试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. &&严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。&&FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.&Rat rheumatoid factor （RF） ELISA Kit&instruction&Intended useThis RF ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of RF in the sample, this RF ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus RF concentration. The concentration of RF in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000&g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000&g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:& The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1.& Standard microplate reader（450nm）2.& Precision pipettes and Disposable pipette tips.3.& 37 ℃ incubatorPrecautions1. &Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2.& Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8&C in their pouch with the desiccant provided.3. &Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature （ 20-25&C）Materials suppliedNote: Standard diluent with Standard diluent concentration was followed by: 482412631.5 IU/mL Reagent preparation20&wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.&Assay procedure1. &Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. &Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50&l to standard well.3.& Add Sample: Add testing sample 10&l Then add sample diluent 40&l to Blank well doesn&t add anyting.4.& Add 100&l of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37&C. 5. &Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution （400&l） using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. &Add chromogen solution A 50&l and chromogen solution B 50&l to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37&C. Protect from light.7. &Add 50&l Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not&appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. &Read the Optical Density （O.D.） at 450 nm using a microtiter plate reader within 15&minutes.Calculation of resultsThis standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. （450 nm） obtained for each of the six standard concentrations on the vertical （Y） axis versus the corresponding concentration on the horizontal （X） axis. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.The sensitivity by this assay is 1.0 IU/mL.Standard curve&Storage& 2-8.validity six months.&FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!&
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