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纳米金在脂多糖诱导免疫应答中的功能研究
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金纳米团簇功能化及其在生物医学中的应用
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基于纳米金和硫堇信号放大检测谷胱甘肽的方法
项目编号：
技术简要说明
本发明实施例公开了一种基于纳米金和硫堇信号放大技术和电化学检测还原型谷胱甘肽(GSH，下称谷胱甘肽)的方法。以L-胱氨酸和DNA1修饰磁性微珠，利用谷胱甘肽切割L-胱氨酸二硫键作用将磁性微珠表面的DNA1切割释放下来；将释放出来的DNA1对纳米金/石墨烯修饰离子液体碳糊电极进行修饰。将DNA2负载在硫堇修饰的金纳米粒子表面得电化学探针。将DNA1/纳米金/石墨烯修饰离子液体碳糊电极浸入电化学探针溶液中，DNA1将DNA2/硫堇/纳米金信号放大单元捕获在电极表面，引起电极表面电化学探针浓度的变化，进行电化学测定。本发明利用纳米金和硫堇信号放大技术和电化学检测技术，实现了对谷胱甘肽高灵敏度测定。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。
该专利全部权利属于青岛科技大学，未经青岛科技大学许可，擅自商用是侵权行为。
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专利权信息
专利类型：发明
专利申请日：
公开(公告)日：
申请(专利权)人：青岛科技大学
申请人：青岛科技大学
公开(公告)号：CNA
分类号：G01N27/26(2006.01)I
发明(设计)人：混旭;孙伟;朱欢欢
国别省市：
总流量：176
录入日期： 02:44
温馨提示：该专利受国家知识产权法保护。如您希望使用该专利，请联系专利权人，获得专利权人的授权许可。
一种基于纳米金和硫堇信号放大技术及其在测定谷胱甘肽的应用，其特征包括以下步骤：(a)以离子液体为修饰剂，制备离子液体碳糊电极；(b)以电化学还原石墨烯和纳米金共沉淀修饰离子液体碳糊电极；(c)以L？胱氨酸和DNA修饰磁性微珠；(d)利用谷胱甘肽切割L？胱氨酸二硫键作用，切割释放DNA；(e)以释放的DNA对纳米金/石墨烯修饰离子液体碳糊电极电极进行修饰；(f)以金纳米粒子和硫堇信号放大构建信号放大技术和谷胱甘肽切割L？胱氨酸作用，建立一种高灵敏度测定谷胱甘肽的新方法。
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纳米金用途及毒性研究
【来源/作者】福建农业大学－郑桑懿 【更新日期】 15:29:28
1纳米金用途
纳米金也能够投递生物大分子,像多肽、蛋白质、DNA和RNA。纳米金通过共价结合核酸分子,也可以通过非共价键结合核酸分子,从而实现对肿瘤的分子治疗。同时,利用纳米金对不同波长的近红外光的光热转换效应,实现对肿瘤的光热治疗,这个方面的发展非常迅。对于体内治疗,纳米金主要是通过系统给药随着血液循环进入到病灶组织。人们遵照两种方法治疗肿瘤,即主动IE向治疗和被动勒向治疗途径。被动紀向治疗是依靠病灶组织由于侵袭增殖产生的约600rnn的血管缝隙和高血供,这样5-10 nm的纳米金能够通过肿瘤组高渗透及保留效应(EPR)大量驻留在病灶组织。主动IE向治疗是依赖纳米金表面的配体分子,进入体内后能特异的结合受体分子,进行针对病灶组织的治疗。
由于纳米金的性质稳定,在体内生物相容性高,所以纳米金在载药方面有很好的应用。首先,载药量大,例如:一个直径为2 nm的纳米金就能够通过单层配机结合约 100 个药物分子。其次,易释放药物,有一些研究证明谷胱甘肽能够介导纳米金载药的释放,并提供了药物释放的模型。还有一些利用肿瘤组织的pH值较低实现的酸响应的纳米金载药的释放,和一些光响应的纳米金载药的释放,这些药物释放对肿瘤的治疗都能起到较特异的良好效果。同时,纳米金在光热治疗中还能够产生单价氧、NO等细胞毒性的物质。
2纳米金的毒性研究
随着纳米金被广泛应用,大大增加了人体暴露纳米金的可能性。因此,伴随纳米金的应用增加,不同类型的纳米金可能潜在威胁人体的健康。目前为止,有关纳米金毒理研究主要围绕纳米金尺寸大小、形状、表面修饰基团、表面电荷、给药剂量、给药方式和不同动物模型来展开。因此,关于纳米金毒性研宄的结果很复杂多样,但总体来说,纳米金的毒性较小,生物相容性很高。下面就从纳米金的体外细胞毒性研宄和体内动物毒性研宄结果展开。
2. 1纳米金体外毒性研究
纳米金体外毒性的研究是围绕不同尺寸大小、不同表面修饰、不同形状的纳米金、不同的纳米金浓度,对不同体外培养细胞的毒性研究进行的。
研究表明细胞对14 nm, 50 run, 72 nm的球形纳米金颗的摄入速度是,对50rnn的纳米金最快、最多,对其它两种尺寸大小纳米金的摄入较慢。也有研究表明球形纳米金比棒状纳米金更容易被细胞摄取。这些结果提示纳米金颗粒的尺寸大小和形状决定了纳米金颗粒进入细胞速度和多少,因此,纳米金颗粒毒性与尺寸大小和形状可能具有很高的相关性。已有实验表明1.4 nm纳米金颗粒的毒性最强,15 nm纳米金颗粒在较高浓度时仍然不具有明显细胞毒性。同时,1.4 nm纳米金颗粒在与细胞孵育12 h后会导致细胞坏死,1.2 nm纳米金颗粒会导致细胞调亡。生物素、梓檬酸、和十六焼基三甲基漠化按(CTAB)不同修饰基团包被的纳米金颗粒的毒性研究结果表明,CTAB包被的纳米金颗粒,在0.05 ^iM浓度时就有细胞毒性,当CTAB被完全洗掉后,纳米金颗粒不再有毒性,说明毒性来自于纳米金颗粒表面的CTAB。梓檬酸和生物素包被的纳米金颗粒,小于250jxM浓度下,没有明显细胞毒性。这些研宄结果表明,不同的表明修饰分子可以决定纳米金的细胞毒性。
关于纳米金的细胞毒性的研宄尽管结果较多,看似有一些认为有毒性和无毒性相关的矛盾结果,但总的来说,纳米金对体细胞的毒性研宄显示较多的报道纳米金是生物相容性高的纳米材料,提示纳米金具有无毒性或较低的细胞毒性。
2. 2纳米金体内毒性研究
关于纳米金的体外细胞毒性的研究较为广泛,这些细胞大多是肿瘤细胞系。同时,细胞水平的研宄不能代表生物系统的研究,关于纳米金对不同生物体的毒性研宄十分重要。Chen etal.通过腹腔注射的方式研究了 3,5,8,37,50,100 nm的纳米金颗粒对Balb/C鼠的毒性,结果发现3,5,50,100 m纳米金颗粒都没有明显的毒性。8和37 nm的纳米金颗粒处理的小鼠出现疲劳、低食欲、皮肤颜色改变等症状,纳米金颗粒处理14天后小鼠出现蛇背、脊柱弯曲等症状,到21天时,大部分处理小鼠死亡。也有研宄结果表明,13nm聚乙二醇(PEG)包被的纳米金颗粒在0.17, 0.85,4.26 mg/Kg的剂量下尾静脉注射到小鼠体内。在注射7天后,发现大部分纳米金颗粒富集在肝脏和脾脏。透射电镜发现PEG包被纳米金颗粒主要在肝脏和脾脏的巨唆细胞中,同时,还发现肝脏细胞出现了潤亡与免疫反应。Cho et al.等发现尾静脉注射PEG包被的4 nm, 100 nm的纳米金颗粒4.26 mg/ Kg后,发现肝脏并没有明显病理变化。
参考文献：
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2.Natalie Meyer,Perm LZ: Reflecting on 25 years with MYC. Nature Reviews Cancer -990.
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11.Pelengaris S,Khan M,Evan GI: Suppression of Myc-induced apoptosis in (3 cellsexposes multiple oncogenic properties of Myc and triggers carcinogenic progression, cell ):321-334.
12.Jain M,Arvanitis C,Chu K,Dewey W, Leonhardt E,Trinh M,Simdberg CD, Bishop JM, Felsher DW: Sustained loss of a neoplastic phenotype by brief inactivation of MYC. Science's STKE 8):102.
【关键词】纳米金，用途，毒性研究，奥科官网&
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金纳米粒子对CHOK1细胞毒性的谷胱甘肽作用机制
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