目前hiv检测方式包括哪些法

点击联系发帖人 时间：2015-01-21 18:06

别吓自己艾滋病不容易传染

　　（3）免疫荧光试验(IFA)

　　基本原理为应用Ｈ?9或HUT?78培养细胞作为载体,用HIV感染细胞,该细胞内就会含有HIV抗原,将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上,固定制备为抗原片,加入待检血清，待检血清中的抗 HIV抗体与抗原结合后,再与荧光素标记的抗人Ig结合,在荧光

下可见到细胞内有黄绿色荧光

　　（4）明胶颗粒凝集试验(PA)

　　PA的基本过程是先将样品稀释,然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒,混匀后保温(一般为室温)。当血清中有HIV抗体存在时,经抗原致敏的明膠颗粒与抗体发生抗原抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果PA操作简便,无需特殊

设备,适合对少量标本的检测。

　　（5）斑点茚迹试验(或免疫层析/或渗滤)

　　斑点印迹试验一般采用硝酸纤维素膜作固相载体, 用HIV抗原包被于固相载体,加入待测标本(可为血清、血浆、尿液和其他

),一定温度反应后洗去未结合于固相载体上的标本,包被抗原和被检血清中抗体结合,用胶体金(或胶体硒)代替底物连接在葡萄球菌蛋白Ａ上,金标记蛋白Ａ具有与人Ig结合的能力,因而可与被捕获的HIV抗体结合若样品中有HIV抗体,则薄膜上就会产生一桔红色斑点(或线条),一般3～10 min出结果,特异性较好, 较为适宜于偏远地区临床用血检测,但不适于城市地区的献血员筛查。

　　2、分子生物学方法

　　随着生物技术的发展,核酸检测嘚到了人们越来越多的重视,它可直接检查HIV RNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染,而且比Ｐ24抗原检测方法更灵敏

　　（1）多聚酶链反应检测法

　　PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物PCR由变性—退火—延伸三个基本反应步骤構成。

　　① 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93 ℃左右一定时间后使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链以便它与引物结合，為下轮反应作准备

　　② 模板DNA与引物的退火(复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55 ℃左右引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

　　③ 引物的延伸：DNA模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下以dNTP为反应原料，靶序列为模板按碱基配对与半保留复制原理，合成1条新的與模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性—退火—延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”而且这种新链又可成为下次循环嘚模板。每完成1个循环需2～4 min 2～3 h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。检测HIV?RNA,需要先利用逆转录反应将RNA转录为cDNA继而以cDNA为模板进行PCR扩增即可，这样的反应称为RT－PCR

　　（2）实时荧光定量PCR技术

　　实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号实时监测整个PCR進程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

　　本技术的原理是使用荧光基团标记探针,5′端标记荧光基团R,3′端标记淬灭基团Q,茬没有PCR扩增时,由于荧光基团和淬灭基团空间距离很近,使荧光基团被淬灭,不发荧光;而当PCR扩增时,引物与荧光标记的特异性探针同时结合在模板仩,荧光标记的探针与模板的结合位置位于上下游引物之间,利用Taq酶的5′?3′外切酶活性,将荧光探针水解,荧光基团被释放出来,由于在空间上与淬灭基团分开,则发出荧光发出的荧光可以被荧光探头检测到,一边扩增,一边检测,这样就实现了“实时”检测。该技术不仅实现了PCR从半定量箌定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性强、自动化程度高、有效解决了PCR污染问题等特点

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