脐带血有必要保存cfu-gm集落数少适合保存吗

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存脐带血有没有作用呢收藏
  4月14日-15日,在北大医院,6岁的晨晨为身患白血病的父亲捐献了造血干细胞。由于父子体重相差太大,晨晨出生时保存的脐带血也派上了用场。这份脐带血可减少对晨晨外周血的采集量,降低对身体的影响。这也是北京市脐带血造血干细胞库(以下简称“北京市脐血库”)第12例自存脐血应用案例。截至目前,北京市脐血库向临床提供脐带血治疗疾病种类37种,已挽救了近700位患者的生命。新京报记者走进北京市脐带血造血干细胞库,深入了解一袋脐带血的诞生过程。北京市脐血库首席执行官邓钺、八一儿童医院血液和肿瘤科主任罗荣牡从脐带血的保存和医疗应用等方面为读者答疑解惑。  “如果你觉得自己可能会用到脐带血,比如孩子早产、家族有人得过一些疾病,就给自己存着,如果觉得不想花这份钱,那就捐出去吧,弃掉太可惜。”罗荣牡说。  自体库  把脐带血存入自体库,是存放者健康风险意识的体现,就和买保险是一样的,需要支付费用,自体库为自体及亲缘间使用。  北京:共存储18万余份,应用了12份。  全球:共存储403万份,应用1000份。  公共库  公共库是公益性的,捐献者把脐带血捐赠给公共库,不需要缴纳任何费用。存入哪个库取决于供者选择捐献还是自存。  北京:共存储2万余份,应用了近700份。  全球:共存储73万份,应用超过3.8万份。  一袋脐带血的诞生  1 采集  由专业医护人员在手术室或产房进行。在婴儿出生后,必须在脐带被剪断后且胎盘还没有离开母体时,使用含有抗凝剂的密封式血袋,从连着胎盘的那段脐带穿刺脐静脉采集脐血,只需1-2分钟,同时采集母亲6ml外周血。  2 运输  成功采集的脐带血会由专业取血员,驾驶专用的取血车,在24小时内运输到脐血库。  每次运输对取血箱温度进行连续监测(4℃-25℃),定期做温度保持的功能测试,确保每一份脐带血的运输安全。  3 制备  脐带血和母亲的外周血先送入收血室检查编码,然后对血进行称重,入库标准是脐带血要达到50毫升。随后被送入计数室,合格的才能进入下一步的制备室。最后将脐带血中的红细胞和血浆等去除,提取造血干细胞。  4 检测  在制备过程中会同步对脐带血样本和母亲的血液样本进行检测,包括核酸检测、酶免检测和细菌检测等,看里面含不含病毒、细菌、霉菌,如果有一项阳性都不能冻存。还会对干细胞的增殖能力进行检测,如果不达标也不能冻存。  5 储存  脐带血在降温前加入冷冻保护剂,防止干细胞在低温情况下破损,保证其活性。然后干细胞会进入程控降温室,通过计算机程序将脐带血逐步降温至-90°C后再转入-196℃深低温液氮中长期冻存,干细胞进入休眠状态。  6 品质监测  每月从公共库脐血中随机抽取4份脐带血,每份脐血进行有核细胞计数、血型、有核细胞活性、CFU-GM培养和CD34+细胞含量检测,监测脐血干细胞的数量、活性及分化能力。  ■ 看脐带血五大疑问专家怎么说?  1 脐带血造能治哪些病?  可治疗白血病等80多种疾病  罗荣牡:脐带血的使用是全方位的,已经确定可以治疗80多种疾病,还有一些没有开发出的领域。目前已经开发的领域,应用最多的是脐带血移植和脐带血副产品。其中脐带血移植包括纯移植和与其他造血干细胞的混合移植。我们医院做的混合移植比较多,相信将来还会开发出更多的副产品。  邓钺:可以治疗血液恶性肿瘤、骨髓异常、免疫缺陷疾病、中性粒细胞疾病、组织细胞疾病、红细胞疾病、血小板疾病、其他恶性肿瘤、骨髓移植失败补救、代谢性疾病等。  2 婴儿存脐带血够救大人吗?  一份脐带血最大能负担100公斤的患者  罗荣牡:原则上,做骨髓移植,量是越多越好,但脐带血比较神奇,它里面有丰富的干细胞,甚至可以支持一个成人的骨髓移植,因为它有很强的增殖能力。100公斤体重的人脐带血移植成功的历史记录还是有的。  邓钺:这方面有很多误解,北京库数据显示,脐带血的使用人群里,成人占48.6%(年龄&18岁),其中救治年龄最大患者80岁;体重超过100斤的患者占近50%,其中体重最大患者95公斤。在欧美,成人脐带血移植量已超过儿童。目前北京库自体冻存的脐带血有核细胞的平均数为8×108,理论上可供100公斤体重的患者自体使用。  3 成人也可捐造血干细胞,脐带血有何优点?  排异反应低于其他造血干细胞  罗荣牡:我从2006年开始用脐带血,至今已经使用了近400例,去年一年用了40例,使用率在逐年提高。脐带血的排异反应要低于其他造血干细胞,主要是脐带血的T细胞不成熟,所以免疫原性比较弱,进入别人身体后的排异反应比较小,但它又活力旺盛。另外,移植时使用的脐带血数量即便比其他干细胞移植的数量小10倍都可以起到同样的效果。  脐带血从检索配型到解冻应用,只要10天就可以了。而从中华骨髓库获得捐献,一般是三个月甚至更长,因为它要临时从供者身上采集造血干细胞,中间有很多工作要做。  4 脐带血能存多久?合同期18年过后就作废了吗?  理论上长期冻存不影响活性  邓钺:18年后孩子成人了,要看孩子是选择继续冻存还是放弃。北京库只有10多年历史,目前使用的冻存时间最长的脐带血是保存了14年的,解冻后的活性仍然有96.14%。  国外有一份冻存了23.5年的脐带血拿出来解冻复苏,检查其细胞活性,在小鼠身上做了一个实验,证明活性没有问题。理论上,脐带血说的就是长期冻存,没有时限。一份冻存了40年的脐带血解冻出来细胞活性也很好。  即便是被保存者弃存的合格脐带血,或者是缴费中途中断,脐带血也还是可以在临床研究方面比如说在一些国家批准的、立项的科研项目中发挥更多的科研价值。  5 自存脐带血是否很贵?  一次性支付不超2万元  邓钺:6800元检测费,每年再收980元的保管费,合同签署的时间为18年。如果一次性支付全部费用的话,一共不到2万元。当然,如果在有核细胞数检测这一步中,这份脐带血没有达到我们的入库标准,并且在申请者签署的知情同意书中,申请保存者也没有要求进行下一步的制备和检测,那么在这种情况下申请保存者不用承担任何费用,由北京市脐带血库承担。
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脐带源间充质干细胞对脐血干/祖细胞体外扩增影响的研究
本文研究工作分为两部分:
第一部分:目的:探讨应用脐带源MSC作基质层的体外培养体系对脐血CD34细胞的体外扩增效率,并进一步探讨脐带源MSC促进脐带血造血干祖细胞的增殖分化的机制。
1.应用贴壁培养的方法从正常足月出生儿脐带中分离培养MSC,通过细胞形态学、免疫表型、分化实验进行鉴定。
2.利用免疫磁珠分离法从正常足月出生儿脐带血中分离CD34细胞。应用三种不同培养体系进行脐血CD34细胞的体外扩增:单独应用脐带源MSC作基质层、细胞因子培养体系和MSC联合细胞因子培养体系。
3.对扩增后细胞数量、集落形成能力和免疫表型进行分析比较。
4.以RT-PCR检测脐带源MSC中SCF、GM-CSF、TPO等细胞因子的表达情况。
1.三组不同培养体系中,以MSC联合细胞因子组的细胞总数增长最快,在培养第4、7、10、14天细胞总数均明显高于另两组;在培养第4天时,MSC组细胞总数增长最慢,随后渐加快,至培养第7天后MSC组细胞总数与细胞因子组无明显差异。
2.三组培养体系中,以MSC联合细胞因子组的CD34细胞的扩增倍数最高,培养第7天增长(3.04±0.84)倍,在第7天之后增长渐缓,其在第7天和第14天的CD34细胞的扩增倍数明显高于细胞因子组,但较MSC组的差异无统计学意义;MSC组在培养第7天以后CD34细胞总数增长速度有增高趋势,在培养第14天为培养前的(4.19±1.37)倍。
3.除第4天的CFU-GEMM外,在扩增其它各时段MSC联合细胞因子组的各集落扩增倍数均明显高于细胞因子组。扩增第7天时,MSC组的BFU-E、CFU-GEMM和HPP-CFU集落扩增总数明显高于细胞因子组;扩增第14天时,MSC组的CU-GM、CFU-GEMM和HPP-CFU集落扩增总数均明显高于细胞因子组。在扩增第7天时,除HPP-CFU外,MSC联合细胞因子组的其它集落扩增倍数较MSC组无明显差异;培养第14天时,MSC联合细胞因子组的CFU-GM和CFU-GEMM:集落总数明显高于MSC组,而BFU-E和HPP-CFU产量二者无明显差异。
4.在培养7天时,细胞因子组的CD34细胞比例为(6.99±1.50)%,MSC组为(16.37±4.05)%,细胞因子联合:MSC组为(5.83±0.85)%;虽然MSC组的CD34’细胞比例较高,但差异并无统计学意义(P值分别为0.065和0.099)。在培养第14天后,三组的CD34细胞比例分别降为(1.51±0.34)%、(2.64±0.45)%和(0.98±0.14)%,MSC组明显高于细胞因子联合MSC组(P=0.012),与细胞因子组差异无统计学意义(P=0.109)。
5.培养第7天和培养第14天,MSC组体系的CD34CD38细胞亚群比例均高于另两组。在培养第7天时,三组之中MSC组的CD34CD33亚群细胞比例最高;在第14天时,虽然MSC组的此亚群细胞仍高于其它两组,但差异无统计学意义。MSC组的髓系祖细胞表型CD34CD13亚群细胞在培养第7天和第14天时均高于另两组。
6.RT-PCR结果显示,脐带源MSC体外可表达SCF和TPO等早期干细胞作用因子。
结论:单独应用脐带源MSC可有效的对脐血CD34细胞进行体外扩增,联合低剂量的细胞因子表现出部分联合作用。脐带源MSC促进CD34细胞向各种造血定向祖细胞增殖分化的同时,可能更有利于保持较早期干祖细胞的扩增,其可能是通过分泌一些促进造血的细胞因子而发挥促造血作用。
第二部分:目的:探讨高危侵袭性T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)的临床特征、治疗与预后。
方法:对国际预后指数评分为中高危或高危的54例侵袭性T-NHL,按WHO分类标准分型,对其临床特点、治疗情况和生存情况进行回顾性分析。
1.54例侵袭性T-NHL中,T淋巴母细胞淋巴瘤(TLBL)12例(22.2%),非特殊型外周T细胞淋巴瘤(PTCL-U)31例(57.4%),肝脾T细胞淋巴瘤(HSTCL)11例(20.4%)。IPI评分中高危12例(22.2%),高危42例(77.8%);其中侵犯骨髓49例(90.7%),侵犯脑膜7例(13.0%)。
2.52例接受治疗的患者中有34例(65.4%)达CR,11例(21.2%)PR,7例无效(13.5%),治疗总反应率(CR+PR)为86.5%。中位生存期11.9(1.7~91.0)个月,3年总体生存(OS)率为16.0%,中位无进展生存(PFS)时间为10.0(0~90.0)个月。
3.造血干细胞移植治疗组、化疗组的3年OS率分别为44.4%、和8.3%,中位生存时间分别为36.0个月和11-3个月(P=0.023);两组的3年PFS率分别为21.9%和5.5%,中位:PFS时间分别为31.7个月和7.3个月(P=0.008)。强化CHOP方案治疗较传统CHOP方案有较高的缓解率,CR率分别为87.0%和51.7%(P=0.009);两者的3年0S率分别为27.6%和7.7%(P=0.012),3年PFS率分别为14.3%和7.2%(P=0.011)。
4.多因素生存分析结果显示治疗选择、化疗疗效是影响预后的主要因素(P值分别为0.027和0.006);而年龄、性别、IPI评分、LDH水平、侵犯骨髓及侵犯中枢神经系统对预后无明显影响。
结论:T-NHL是一组高度异质性肿瘤。中高危、高危T-NHL,尤其是PTCL-U和TLBL,虽然化疗反应率较高,但远期疗效很差。需要探索新的治疗方案,自体干细胞造血移植可能是较好的选择。
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