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骨髓病理流式细胞学诊断
&&&&&&&&&病例1：男性，15岁，发热近1个月，颈部淋巴结肿大3个月，保守治疗无效，临床怀疑肿瘤性疾病。外周血的流式细胞学检查提示：传染性单核细胞增多症。病例2：患者，男，14岁，入院前1个月出现右侧膝关节疼痛，为间断性，不影响活动，无发热、关节红肿。骨髓活检和涂片、细胞化学染色提示：急性髓性白血病，非特殊类型（NOS型）。
　　在血液肿瘤的诊断中，基于流式细胞技术的免疫分型检测已是常规且重要的手段之一。由于流式细胞技术具有敏感度高、特异性强、报告周期快等特点，在鉴别疾病的良、恶性和肿瘤的系别方面有着重要的作用。
　　在鉴别疾病的良、恶性方面主要包括免疫表型和细胞的克隆性检测两个方面。肿瘤细胞一般来说都伴有表型的异常，虽然并非所有表型异常的细胞均为恶性。如在T细胞肿瘤中，最常见的表型异常就是CD2、CD3、CD5、CD7等泛T抗原表达缺失或表达强度发生改变，其次是CD4/CD8比例异常；但在病毒感染性疾病中，也经常出现CD7阴性或表达减弱，或者CD4/CD8比例的改变。因此，我们在关注免疫表型的同时要寻找克隆性证据。流式细胞学在细胞克隆性检测方面主要包括B细胞的轻链限制性表达和T细胞受体&链V区（TCRV&）检测。
　　病史：男性，15岁，发热近1个月，颈部淋巴结肿大3个月，保守治疗无效，临床怀疑肿瘤性疾病。
　　血常规：白细胞计数为17.6&109/L，淋巴细胞占62%，血红蛋白正常，血小板持续减少，外周血涂片可见异形淋巴细胞（图1）。
　　免疫表型：外周血的流式细胞学检查发现淋巴细胞占有核细胞的52%，以T淋巴细胞为主，表达CD3、CD2和CD5抗原；CD7抗原表达减弱（图2），CD4与CD8比值为0.17，比例明显减低（图3）。TCR&V&检测未发现克隆性增生。结合病史，考虑不排除病毒感染，建议行病毒学检测。血清EB病毒抗体检查为阳性。
　　诊断：。
　　■&点评
　　本例患者流式细胞学检查结果显示CD7抗原表达减弱，CD4与CD8比值明显倒置，为异常表型，但T细胞克隆性检测未见异常，此外，该患者的病史（青少年、男性）和临床表现（发热、淋巴结肿大、白细胞增高和以淋巴细胞为主）均符合病毒感染的特征。因此，该病例的正确诊断得益于流式T细胞克隆性检测与临床特征相结合，因为CD7、CD4、CD8等抗原的改变并非肿瘤特异性具备，这也是病毒感染中的常见表现。
　　当然，典型的传染性单核细胞增多症是一种临床诊断。该病例的特殊性在于过多不典型的临床表现和实验室异常，包括病程过长、治疗无效、血小板过低等。因此，流式细胞学检查避免了不必要的影像学和实验室检查，包括可能的骨髓活检。
　　除了前面所述，流式细胞学分析在血液肿瘤的鉴别方面也有重要意义，如髓系、B系、T系急性白血病的鉴别，尤其是混合表型白血病，均是依赖于免疫分型的。此外，在小B细胞淋巴瘤和NK细胞肿瘤的诊断和鉴别诊断中，流式细胞学的免疫分型分析尤其有效。以微分化型（AML-M0）为例，其占AML的比例不到5%，可发生于任何年龄阶段，通过形态学和光学显微镜细胞化学检查证实没有髓系分化的证据，容易误诊为急性淋巴细胞白血病（ALL），必须通过流式细胞学免疫表型检测与ALL相鉴别。
　　病史：患者，男，14岁，入院前1个月出现右侧膝关节疼痛，为间断性，不影响活动，无发热、关节红肿。
　　入院前3天行磁共振成像（MRI）检查发现少量关节积液，血常规显示白细胞33&109/L，血红蛋白96&g/L，血小板100&109/L，血涂片可见原始幼稚淋巴细胞，以急性白血病收治入院。
　　骨髓活检及涂片：发现幼稚细胞广泛增生，胞体中等偏小，胞浆少，核圆形或不规则，染色质细致，倾向急性淋巴细胞白血病的诊断。
　　细胞化学染色：发现原始细胞糖原染色（PAS）阳性率为82%，阳性指数为116；髓过氧化物酶染色（MPO）显示阴性，苏丹黑B染色（SBB）显示阴性，结论为原始幼稚淋巴细胞比例增高。
　　流式细胞学：发现原始细胞占有核细胞的96%，表达CD38、CD33、CD123和CD7，部分表达CD34和CD117，不表达CD13、CD2、CD5、MPO、cCD3和TdT，符合AML-M0的表型。
　　遗传及分子生物学：未发现特征性基因突变或易位。
　　诊断：急性髓性白血病，非特殊类型（NOS型）
　　■&点评
　　AML-M0的诊断
　　临床表现&AML-M0的临床表现与其他急性白血病相似，通常有骨髓衰竭表现，如贫血、血小板减少和中性粒细胞减少，可有白细胞增高伴原始细胞增多。
　　实验室检查&实验室检查方面，形态学特点为细胞中等大小，无颗粒。较少的情况下原始细胞胞体小，染色质较浓密，核仁不明显，胞质少，类似原始淋巴细胞。&细胞化学染色一般表现为MPO、SBB、萘酚-&ASD&-氯醋酸酯酶（CAE）均阴性（阳性原始细胞比例＜3%）。&-萘酚醋酸和丁酸酯酶阴性或呈非特异性弱阳性或局灶性阳性。
　　免疫表型&免疫表型方面，肿瘤细胞表达早期造血相关抗原，如CD34、CD38、HLA-DR，不表达粒系和单核系成熟相关抗原，如CD11b、CD15、CD14、CD64、CD65。原始细胞通常表达CD13或CD117，大约60%的病例表达CD33。&B和T相关特异性胞浆标志，如cCD3，cCD79a和cCD22均为阴性。&需要注意的是，50%的病例末端脱氧核苷转移酶（TdT）为阳性，40%的病例可表达CD7。
　　遗传学检查&该病例的遗传学检查未发现独特的染色体畸变，部分患者可有复杂核型和非平衡异常，如-5/del（5q），-7/del（7q），+8和del（11q），但这些表现都没有特异性。
　　综上所述，AML-M0的诊断主要依靠流式细胞学免疫表型的检测，仅通过细胞形态学及细胞化学等检查，容易误诊为ALL，从而导致对患者错误的诊断、预后判断及治疗。
　　流式细胞学的缺陷
　　流式细胞学也有自身的缺陷所在，由于所用标本必须是单细胞悬液，因此不能显示例如淋巴结、皮肤等病灶的组织结构；此外，像骨髓纤维化、肿瘤坏死、反应性增生等，流式细胞分析很难提供有效的诊断；由于血小板的黏附干扰，流式细胞分析在巨核细胞白血病（AM-M7）的诊断方面也有一定的难度；另外，由于流式细胞分析的标本不能够长期储存，使得这项技术不能应用于回顾性研究。而针对上述不足之处，组织病理学检查具有较大的优势，因此，需要二者相互补充，取长补短，为临床提供全面而准确的诊断。
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临床流式细胞学检验的现状与未来
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3秒自动关闭窗口& 流式细胞术检测肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群研究
流式细胞术检测肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群研究
摘 要：目的 探讨肿瘤患者T淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法 采用流式细胞术检测27例肿瘤患者和25例正常对照组的T淋巴细胞亚群。结果 肿瘤患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞和CD4^＋／CD8^＋比值
【题　名】流式细胞术检测肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群研究
【作　者】缪界萍 杨学文 赵春
【机　构】江苏省中医院检验科,江苏南京210029
【刊　名】生物医学工程与临床,
2006(1): 41-42
【关键词】流式细胞术 肿瘤 T淋巴细胞亚群
【文　摘】目的 探讨肿瘤患者T淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法 采用流式细胞术检测27例肿瘤患者和25例正常对照组的T淋巴细胞亚群。结果 肿瘤患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞和CD4^＋／CD8^＋比值明显低于对照组并有统计学意义，而CD8^＋T细胞显著高于对照组（P〈0．01）。结论 肿瘤患者的免疫功能下降。流式细胞术对肿瘤患者的免疫功能的检测具有快速、敏感、准确的特点，对于评价疗效、判断预后具有重要价值。
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流式细胞术,肿瘤,T淋巴细胞亚群
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流式细胞室
发布时间：07-09-2010
地址：东院老楼10号楼206室
电话：010-
简介：自我院1995年购入第一台流式细胞仪（Coulter），我科就积极参与并承担了血液病的流式细胞术临床检验项目以及分选等科研检测工作。至今已从事流式细胞术的临床检验和科研课题工作15年。年完成标本量约1500例次。目前我室现有流式细胞仪2台，包括BD公司4色Calibur流式细胞仪以及BD公司6色CantoII流式细胞仪各一台。我室现开展的项目包括急性白血病免疫分型、PNH异常细胞检测和CD34造血干细胞计数。我室多次参加卫生部临检中心组织的流式细胞术（血液）质控项目，均以满分通过检测。近期内，我室拟开展的临床检测项目包括：白血病残留病变检测、造血干细胞移植的免疫重建检测、和慢性淋巴细胞白血病的预后诊断。
检测项目简介
外周血CD55和CD59检测
适应症：诊断PNH
标本留取：EDTA抗凝血2ml
结果判读：粒细胞、红细胞的CD59、CD55阴性细胞占5％以上提示PNH的可能
免疫分型（外周血、骨髓或脑脊液、胸腹水）
适应症：明确白血病、淋巴瘤和骨髓瘤类型，以及明确体液内细胞类型
标本留取：EDTA抗凝外周血2ml或肝素抗凝骨髓2ml或其他体液5～10ml
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&&ISSN: &&CN:&32-1577/R&&&&
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流式细胞术分析不同分期的恶性肿瘤外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化
安徽中医学院第一附属医院肿瘤科
&&修回日期
&&网络版发布日期&
&&接受日期&
摘要&&目的：研究肿瘤患者不同分期的外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化。方法：采用流式细胞术对３６例肿瘤患者外周血Ｔ细胞及其亚群进行检测，并对不同分期患者的结果进行分析比较。结果：３６例肿瘤患者ＣＤ＋３ Ｔ、ＣＤ＋４ Ｔ细胞水平均下降，Ⅳ期患者的ＣＤ＋３ Ｔ细胞水平与Ⅰ、Ⅱ期比较有显著性差异（Ｐ＜０.０５）；Ⅳ期患者的ＣＤ＋４ Ｔ细胞水平与Ⅰ、Ⅱ期比较有非常显著性差异（Ｐ＜０.０１），与Ⅲ期比较亦有显著性差异（Ｐ＜０.０５）；ＣＤ＋８ Ｔ细胞则随临床分期的提高略有升高，但无统计学差异；ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 的比值随临床分期的提高而降低，Ⅳ期患者与Ⅰ、Ⅱ期比较差异显著（Ｐ＜０.０５）；ＮＫ细胞随临床分期提高呈现轻度降低后增加的趋势，但无统计学差异。结论：恶性肿瘤患者随着ＴＮＭ分期的提高，其机体的细胞免疫功能呈现逐渐下降的趋势。
恶性肿瘤；　细胞免疫；　流式细胞术；　Ｔ细胞亚群 &
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作者个人主页: 周晋华}