【摘要】:目的:采用不同的化學方法,分别制备以8-L-多聚赖氨酸为骨架的抗体、辣根辣根过氧化物酶酶多聚物IgG-PLL-HRP和以黄原胶为骨架的IgG-XG-HRP,并通过酶联免疫吸附剂测定(ELISA)及免疫组化(IHC)对兩者的性能进行评价方法:(1)
IgG-PLL-HRP制备路线:首先,将铰链2-(4-溴丁酰氨基)乙酸乙酯与ε-L-多聚赖氨酸连接,硅胶柱层析分离纯化,通过NMR与FTIR验证接枝是否成功;然后,将铰链末端修饰为活化酯;最后,将抗体和辣根辣根过氧化物酶酶(HRP)同时多聚到ε-L-多聚赖氨酸骨架上,Sephaccyl葡聚糖凝胶色谱分离纯化得到:IgG-PLL-HRP。(2)
IgG-XG-HRP制备路线:首先,以高碘酸钠法氧化黄原胶上的邻羟基形成醛基,BCA法检测醛基的生成;然后,将HRP与黄原胶骨架相连,Sephacryl葡聚糖凝胶色谱纯化得到XG-HRP;最後,将抗体与XG-HRP连接,Sephacryl葡聚糖凝胶色谱分离纯化得到IgG-XG-HRP结果:(1)成功构建IgG-PLL-HRP。但IgG-PLL-HRP在ELISA或免疫组化方面对抗原的放大效果较之于市售无多聚物骨架酶标抗體IgG-HRP提高效果不显著(2)成功构建IgG-XG-HRP。IgG-XG-HRP的ELISA检测灵敏度相对于IgG-HRP提高了近100倍,免疫组化染色效果也强于IgG-HRP.结论:成功制备IgG-PLL-HRP和IgG-XG-HRP利用ELISA及免疫组化对IgG-PLL-HRP和IgG-XG-HRP的性能進行了评价。研究结果为今后的抗体酶多聚物的结构设计、验证及表征提供了新的方法和思路
【学位授予单位】:福州大学
【学位授予姩份】:2014
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