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我国政府在不断加大HIV核酸检测推广力度
我国自1985年发现第一例艾滋病病人以来,感染人数逐年增加.尽早发现感染人群并及时切断传播途径是有效防止HIV传播的重要措施。为此，一个准确有效的检测方法和策略就显得尤为重要。艾滋病核酸检测，直击艾滋病病毒的核酸，诊断有无病原体感染。核酸检测作为一项新兴的检测技术已在血液筛查领域开展应用，它是对免疫学检测方法的重要补充，在缩短检测窗口期、提高病毒检出率方面具有相当的优势，在第六届中国艾滋病防治国际合作项目经验交流会上，专家就指出：在我国现有的技术条件下，必须要加大我国HIV核酸检测的技术的推广力度，力求2013年底在我国20多个省普及HIV核酸检测技术。我国目前的HIV的检测方法主要分为以下3种:a.核酸检测(维斯塔：www. )、b.抗原检测、c.抗体检测。而其中核酸检测方法是HIV感染早期判断的有效方法。HIV核酸检测通常采用荧光PCR法,其又分为定量检测和定性检测两种,定量检测即为RNA载量检测,能够检测到体内病毒颗粒的数量体现了病毒的复制情况;定性检测主要用于判断有无病毒感染,其又分为HIV RNA定性检测和HIV前病毒DNA检测。HIV 前病毒DNA检测直接检测艾滋病毒感染者淋巴细胞中病毒创建的双链脱氧核糖核酸的基因组。HIV核酸检测为何如此受青睐?1 早期诊断婴儿的早期诊断：HIV感染母亲所生小于 18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV核酸检测均为阳性即可作出诊断。18个月龄以上儿童诊断与成人相同：有急性HIV感染综合症或流行病学史，且不同时间的两次HIV核酸检测结果均为阳性，即可诊断。也可使用多样品集合的方法，对采供血机构的原料血浆以及HIV抗体阴性的高危人群样品进行集合核酸检测，及时发现窗口期感染，降低&残余危险度&，减少二代传播。2 疑难样本的辅助诊断在一般情况下，HIV抗体检测足以对HIV感染与否做出正确诊断，但在特殊情况下，单纯HIV抗体检测结果不能进行明确的诊断，如在感染早期或疾病终末期出现抗体不确定反应时，RNA的测定结果可帮助提供HIV感染早期或终末期的证据。由于试剂的灵敏度、接受有效的抗病毒治疗后以及存在长期低水平病毒的少数感染者等原因，应对其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。3 遗传变异监测可用于HIV分子流行病学监测以及HIV感染传播链的分析，HIV病毒的鉴定和分析以及人群HIV遗传变异趋势的监测。4 耐药性监测可用于HIV耐药检测和监测，指导公共卫生医生了解耐药性病毒株流行的态势和指导临床医生判断抗病毒治疗效果和修改抗病毒治疗方案。5 病程监控及预测HIV感染发生后病毒载量变化具有一定规律，这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。因此定期进行病毒载量检测有助于确定疾病发展的阶段，以确定相应的治疗方案。6 指导抗病毒治疗及疗效判定通常在病毒载量达到一定水平后(如&35，000～50，000c/ml)抗病毒治疗才显示良好的治疗效果。治疗后，通过病毒水平的检测能够确定治疗是否有效。通常在治疗6个月后病毒水平降低0.5 log以上才被认为临床有效。然而HIV核酸检测由于成本高,对实验条件的要求比较苛刻,所以并未大范围推广,目前在HIV诊断和血筛中仍主要沿用抗体检测.为了有效控制艾滋病的传播将核酸检测和抗体检测结合起来,最大限度的发挥二者的优势势在必行。
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艾滋病核酸检测，直击艾滋病病毒的RNA或DNA结构，检测血液中是否存在病毒核酸，诊断有无病原体感染。采用PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂和自行研究开发设计的复合引物，覆盖常见的HIV毒株，具有很高的灵敏度。使用二次扩增的套式PCR扩增方法，提高检测的特异性，降低假阳性的概率。
核酸检测将艾滋病病毒的检测窗口期缩短至11天，并且核酸检测这项技术目前可将乙肝、丙肝病毒的检测“窗口期”分别由原来的50天、72天缩短到25天、59天。[1]HIV基因组由两条单链RNA组成，每个RNA基因组约为9.7k，在RNA5′端有一帽结构（m7G5ppp5′GmpNp），3′端有poly（A）尾巴。HIV的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同，均由5′末端长重复（long terminal repeat，LTR）、结构蛋白编码区（gag）、蛋白酶编码区（pro）、具有多种酶活性的蛋白编码区（pol）、外膜蛋白（env）和3′末端的长重复LTR区组成。核酸提取均采用磁珠法。
1）磁珠提取的原理：
将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸，并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。
裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱
a.磁珠提取特异性高，受标本因素影响小，灵敏度高
b.易于实现自动化
a.成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动)。
b.完全手工工作，工作量太大。根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction，nPCR)引物。将裂解液先用外侧引物扩增，其产物再经内侧引物扩增，直接走凝胶电泳判定结果。nPCR的敏感性。较常规PCR高100～1000倍，可检测到0.5fg质粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。
根据专业文献记载，用本法检测63名HIV-1感染者全为阳性，而61名健康人和可疑者均为阴性，后者经追踪检测抗体排除了HIV-1感染。
由此可知，nPCR是一种敏感性极高、特异性很强、操作简便易行的HIV-1基因检测技术。它已经在早期诊断和外周血病毒含量检测中发挥了重要作用，而且有着更广阔的应用前景。
检测的优点
人体感染艾滋病病毒后，一般需要2-12周，平均42天左右血液中才可检测到HIV抗体。在这段时期内，常规检测技术根本无法检测出HIV病毒，这就是常说的“HIV窗口期”。“”的存在，也解释了为什么一些病人在接受了正规医院输血后却感染艾滋病的原因。
在感染过程中，首先出现的是病毒RNA，这时可以用PCR的方法检测出来，之后出现的是IgM抗体，使用双抗原夹心法即可以检测出来，然后出现的是IgG抗体，使用间接法可以检测出来。
现在省市疾病控制中心和检测试纸，使用的检测方法都是检测抗体抗原，无法避免“HIV窗口期”因素的干扰。所以说，常规检测技术在HIV窗口期内存在重大缺陷。有些人认为艾滋病既然无法治愈，查出来也没用，不愿进行核酸检测。实际上，早期诊断、早期治疗不仅有利于延缓病情发展，提高生活质量，还可及时保护他人免受感染，有利于艾滋病的控制。
1、解决艾滋病病毒感染的“窗口期”问题
原来的HIV免疫学检测方法都存在一定的窗口期。艾滋病病毒在进入人体后，机体需要经过一段时间才会产生抗体，在此期间血液抗体检测呈阴性，抗原抗体通常是在感染后3—6周后才能被检测出来，时间上较久，而且在准确度上会大打折扣。在虽测不到HIV抗体，但体内已有HIV，因此窗口期同样具有传染性。
在血液筛查方面，艾滋病病毒核酸检测无疑可以增加血液的安全性。国家相关法律规定，由血源引起的感染不属于医疗事故。原来的免疫学检测方法都存在一定的窗口期，这样给带来很大的威胁。在目前EIA试剂检测后，美国几种主要经血传播病毒的“”分别为：HIV 22天，HTLV 51天，HCV 72天，HBV 63天；输血后病毒危险性分别为1:493 000，1:641 000，1:103 000和1:63 000。在美国，艾滋病病毒核酸检测已经常规用于HIV 和HCV筛查。这样做大大降低了输血后感染HIV病毒的残余危险性。
2、及早发现，早期药物预防，降低感染几率
进行HIV病毒核酸检测，能及早发现感染，在HIV病毒入侵两周内，及时注射丙种球蛋白抑制HIV，可以降低被感染的几率。
艾滋病病毒是逆转录病毒，所谓逆转录病毒是它在侵入宿主细胞后，以自己的单链RNA为模板，按照碱基互补配对原则，在逆转录酶的作用下，合成cDNA，新合成的cDNA插入宿主的核DNA中，随宿主DNA复制、转录、翻译达到扩增目的病毒。是逆转录抑制剂，就是阻止HIV逆转录宿主DNA过程的药物。及时发现，尽早治疗，能降低被感染的几率，也能增强机体对HIV 的特异性细胞和，缩短潜伏感染的半衰期，维持CD4+ 细胞的功能，减缓艾滋病的病程进展。
美国《时代》杂志网站近日发布了“2011年十大医学突破”评选结果。其中有一项即为“艾滋病防治的新进展”。新研究发现，抗逆转录病毒（ARV）药物不仅帮助艾滋病患者抗击HIV，还能让健康人远离艾滋病毒。美国华盛顿大学一项涉及4758名参试者的研究发现，服用该药的健康者HIV降低73%。
3、快速排查感染隐患，解除恐艾心理压力
近年来，随着艾滋病的迅猛发展，有许许多多的人患上了这种艾滋病恐惧症。恐惧，是人类的一种本能的反应，适度的恐惧对人类的生存是有利的，但不必要的、过分的恐惧却是有害的，是一种心理异常。
艾滋病恐惧症就是这样一种心理异常，它包括以下情形：不必要地过分担心自己会得艾滋病，或者毫无根据地怀疑自己感染了艾滋病，患者同时伴有一些情绪异常和行为异常，严重影响其学习、工作、生活及社会交往。
进行核酸检测，用最先进的技术，摆脱艾滋阴霾。上海维斯塔生物科技有限公司的HIV病毒核酸检测系统，由国家级的HIV专业研究和检测人员开发，用最快速和准确的方法排查感染隐患，并有国家CDC的质控把关，将保证检验结果的准确性。相信科学检测，如果检测为阴性即可完全排除感染的可能，不要再无谓地担心和猜疑，解除恐艾心理压力，还您健康生活。
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市血液中心2013年核酸检测检出1例HIV
作者：黄敏&&&来源：南京红十字血液中心&&&发布时间： 15:48&&&点击率：864
&&& 市血液中心自日全面开展核酸检测（NAT）以来，共筛查了63792份献血者的血液样本，其中发现一例HIV窗口期样本。该样本NAT初筛阳性，传统血清学实验（ELISA 3代和4代试剂）结果均为阴性。进一步追踪检测发现，8天后血清学实验结果均转为弱阳性，NAT检测结果依然为阳性；16天后再次抽血检测，血清学实验结果阳性均显著增强，送市疾病预防控制中心HIV确证实验室进行免疫印迹法（Western Blot）确认后，结果为可疑；2个月后再次抽血并送市疾控中心确认，结果为确证HIV阳性。
&&& 血液是HIV传播的重要途径之一，在我国通过单采血浆及输注血液制品而感染HIV者分别占9.7%和1.5%。核酸检测能够将HIV感染的窗口期大大缩短，由原来的22天缩短为11天左右，为临床输血安全提供了有力保障。
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我国在加强开展干血斑HIV核酸检测
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　　病毒体的核酸检测，目前主要依靠PCR技术，随着PCR的普及，很多病毒都可以通过这种方法检出，其具有窗口期短，准确性、特异性高等特点。这种技术对样本的选择比较多样化，包括液体血液、干血斑、组织细胞等均可以作为其样本。
　　近年来，国外不断有应用滤纸片干血斑来检测HIV抗体、HIVDNA及RNA的报道，滤纸片是外周血采集和运输的极好载体，外周血滴在滤纸片上可以制成滤纸片干血斑，有很好的生物稳定性，并且方便贮存与运输。我国是一个地域十分广阔的大国，各地经济科技实力差异较大，为了在我国开展与推广这项技术，国家艾滋病参比实验室(NARL)从2004年开始，应用滤纸片干血斑检测HIV抗体、DNA、基因分型与病毒载量测定等方面的研究，并于2012年4月举办了第一次“全国滤纸片干血斑HIVDNA检测技术培训班”。
　　研究表明血样的滤纸片干血斑样本与血浆样本用EIA法检测，符合率为100%，相关性为0.919;两种样本经WB确认，条带完全一致的占总数的42.85%,其中主要条带(至少有2条env带出现，或至少1条env和p24带同时出现)的符合率为100%。其次，应用滤纸片干血斑检测HIV前病毒DNA，结果发现， 在重复2-3次的前提下，滤纸干血斑样本HIV感染基因诊断敏感度与全血样本比较无统计学显著性差异。22份两种阴性样本特异性均为100%(CI 95.93%100%)。18对全血和滤纸干血斑样本HIV基因诊断一致性分析，符合率94%。进一步又研究了应用滤纸片干血斑样本用于HIV基因序列测定和亚型分析，结果发现，干血斑样本与全血样本DNA PCR产物亚型分析一致，氨基酸序列比对同义和非同义替换比例、位置和类型基本一致。
　　鉴于上述研究，为保证在实际操作过程中实验室的检测质量，国家艾滋病参比实验室制订了能力验证计划，计划包括制备能力验证盘并定期提供开展此工作的各实验室和对其检测结果进行评价。目前，全国已有15个实验室参加了技术培训， 包括上海维斯塔()的合作单位上海公共卫生中心实验室在内的13个实验室参加并完成了国家艾滋病参比实验室的第一次能力验证活动。}