我妈妈今年查出卵巢癌晚期,合并有腹水和胸水,经医生诊断先化疗后再手术,化疗用的_百度知道
我妈妈今年查出卵巢癌晚期,合并有腹水和胸水,经医生诊断先化疗后再手术,化疗用的
我有更好的答案
医生可能是怀疑有转移吧,遵医嘱,应该的.
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12-05-03 &
卵巢癌腹水的常规治疗，通常采用抽水治疗，往往是治标不治本，腹水反复发作，不能从根本上一直腹水的再生，反而在每次治疗过程中给患者增加了很大的痛苦，因此抽水治疗卵巢癌腹水不是最佳的方法;肿瘤DC-CIK治疗卵巢癌腹水，通过提高机体免疫力，增强患者免疫细胞，从而达到清除肿瘤细胞，抑制腹水出现的疗效，肿瘤DC-CIK治疗安全无毒副作用，临床应用广泛。&&&
请登录后再发表评论!我妈妈是2009年11月份确诊的卵巢癌浆液性三C，低分化，在武汉同济做的手术，术后化疗9次（卡铂+力朴素），5个月复发，再次手术，术后化疗6次（顺铂+艾素），后又复发，采取中药调理，放弃化疗。2011年11月份出现腹水，住院姑息治疗，抽6000毫升水，黄色乳状的，半月后腹水复发，抽水6000.最近出现胸水，压迫肺部呼吸苦难，今早抽胸水1000毫升。食欲很差，进食困难，腹腔癌瘤压迫直肠、膀胱，肛门坠胀厉害，大便有点失禁。妈妈现在的感觉就是生不如死、痛不欲生啦！我原来一直想尽量减轻痛苦，让妈妈舒服一点，可如今我发现，这样的愿望是奢望，妈妈一天比一天难受，每天都被折磨的死去活来，而我却束手无策。妈妈住院已经一个多月了，身体根本无法耐受化疗。
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注意吧，出现这种情况，恕我直言，你妈妈情况不乐观。多多关心你的妈妈，在多的治疗此时都是无用的。我妈妈最后就是这个状况，乳糜状腹水,胸水，我还在各医院的跑，没有多陪妈妈。希望你多陪陪你妈妈，不要像我一样后悔！
你妈妈情况和我妈妈一样，每隔半年复发，但是我妈妈坚持了三年，化疗28次
是的，谢谢！
我妈妈也是坚持了3年。今晚去和她聊了会天，她说每句话都要一个字一个字的说，边说边喘，很难受。但有人说说话，可以分散一下注意力！妈妈说做梦说阎王爷要收她，她就拼命的跑，跑了。妈妈是个意志力很坚强的人！
要坚强。　　癌症病人要有毅力。最后都是和痛苦作斗争。哎。　　回首我妈妈走过的路，全是汗水和泪水。
妈妈4岁丧母，生下我不久又丧父，没有兄弟姐妹。和爸爸结婚后，爸爸在部队，两地分居十几年，妈妈一个人独自抚养我和弟弟，还要赡养一个瞎奶奶。这一生受了太多的苦。她生病后，总是觉得，为什么自己一生受了那么苦，老天爷还要让她得这样的病，受这样的罪？
眼泪流过脸颊的感觉，就像利刃划过心头一样……　　
　　正常人这么频繁的化疗的话，身体一样会垮。
　　西医冶癌的局限性在于，无论是放射还是化学还是手术，都对人体造成重大创伤。抵抗力不强的人，不是死于癌细胞，而是死于这些创伤。
谢谢大家关心。妈妈以前身体非常好，自我记事起，妈妈只是又一次发过烧，而且自己好了。妈妈冬天经常不穿棉袄的，就是一个身体一直很好的妈妈，得了这个病！
我妈妈也是患卵巢癌，到最后的阶段也是生不如死，很可怜呀！　　如果不能继续化疗的话，就办家庭病床吧，把妈妈接回家，在自己的家里总比在医院强。　　好好的照顾她，疼痛的话一定要给她止痛药。　　这是最难的一段了，你一定要比你妈妈更坚强，因为她很需要你。让她知道是你在带着她往前走，让她依靠你，让她不要害怕。
我妈妈也是卵巢癌，才手术一年半旧已经复发了，情况不容乐观，食欲变的很差，化疗也有十几次了，朋友一起共勉，一同给妈妈祈福！
坚强的面对吧，作为有同样经历的人，很能理解，其实病人最痛苦了，治疗要适可而止，癌症毕竟是人类没有攻克的世界难题，没有办法，病人有什么愿望，都尽量满足，其实你自己一定不要乱啊，想想我妈妈，最后的时间真是汗水相伴，一个多月没有躺下睡个觉，我们看到那是真心痛，可是有什么办法呢，该死的癌症，为什么要对善良的母亲这么残忍，老天爷你为什么不睁大眼睛，其实根本就没有什么公平和正义，只是找点精神寄托罢了。
是的。妈妈越来越瘦，每天都是很坚强的在吃饭。看着心里难受哟！
送上祝福，找些中药吃吃，做一下保守治疗吧，网上看的青蒿素不知道有没效，希望楼主妈妈能有奇迹。　　我妈也是卵巢癌，1年了，现在可能直肠又有2cm结节了，一起努力吧。　　
祝福所有的妈妈，肿瘤医院也准备放弃妈妈了，k我们必须坚强。祝福所有的妈妈。
妈妈这几天便血越开越严重，大便失禁很痛苦！昨晚开始左腿水肿了！这病真是折磨人啦！我现在每天最想的就是多去医院陪陪妈妈，坐在她的床前拉着她的手。妈妈说现在大便失禁，很脏也很烦人，我说没有什么的，我小时候你不是一样给我端屎端尿的！明天给妈妈买纸尿裤去！
癌细胞逐渐在吞噬妈妈的躯体，不知道妈妈还要面临怎样残酷的折磨！昨天抽完胸水（上周抽了5000毫升），妈妈感到不喘气了，很舒服，昨天心情很好。但昨晚就又不舒服了，大便失禁，便血，整条左腿肿的很大！妈妈今天说自己肚子又大了，明天做个B超看看。这胸水腹水真是此起波伏，折磨人啦！妈妈吃的很少，哪怕是吃，也是坚强的勉强自己吃一点点！我说给妈妈买点补血的阿胶什么的，妈妈说不要浪费钱了！
为了和妈妈一起吃顿团年饭，老公和儿子决定晚点回老家去。这也许是妈妈最后一顿团年饭了，妈妈很明白的嘱咐我，让我到时候摄摄像。
难受!为什么要有这么折磨人的病！！！！！　　
　　陪妈妈好好过个平安年，祝福！
　　祝福你妈妈，希望能少点痛苦
　　@静静的清风车影　　全家一起过个快乐的团圆年，不管是含笑还是带泪，珍藏所有的美好时光。　　祝福你们！
　　团年饭那天把妈妈从医院直接接到了酒店，妈妈很坚强的自己走到位置上，咬着牙坚持到团年饭结束。亲戚们欢聚一堂，大家给我妈妈很多鼓励!团年饭结束后，妈妈躺了一下午，太累了！妈妈让我吃过团年饭后就和老公、儿子一起回去几百公里外的宜昌看公公婆婆，说自己不要紧！回到宜昌的那个晚上做了一晚的梦，第二天一早给妈妈打电话，妈妈说自己不要紧，我还是可以听出妈妈很刻意的提高音量！
　　坚强，一定要挺下去，虽然我知道我们现在还没到这个地步，但始终也会来的，我一定要努力下去。。。。
　　妈妈今天住进医院，吐了一天。医生说两种可能：一种是胸水压迫胃部；二是肠梗阻。要是肠梗阻就很麻烦！
　　今天B超，显示妈妈左胸的水又涨起来了，明早抽血后，再决定抽水。妈妈呼吸困难，瘦成了皮包骨！
　　早上用开塞露，妈妈解了一点点大便，象蚯蚓状的，带血！
　　祝福你妈妈，希望能少点痛苦!!
　　妈妈这两天基本没怎么进食，呕吐，吐得都是胆汁！今早胸腔抽水1000毫升，水和腹水一样是黄色乳浆状的。我在医院一直陪着，妈妈睡了一小会。我发觉妈妈的面庞蜡黄蜡黄的，很消瘦！
　　妈妈今天吐了一天，胆汁都吐出来了，没怎么进食。因为几天没大便，担心肠梗阻，晚上用了开塞露，结果妈妈肚子坠胀，翻江倒海，不能躺，只能坐在便盆上，痛得只扯自己的头发。妈妈是何等坚强的人，以前两次大手术都一声不吭的！　　
　　医生对于妈妈的症状束手无策，没办法呀！太残酷了，就这样看着妈妈生不如死的被病痛折磨呀！　　
　　卵巢癌的末期的痛苦简直是非人的，癌肿压迫肠道，最终引起肠梗阻，病人无法进食，又呕吐厉害，肚子坠胀，下面又解不出来，就算解一点也是失禁的情况。妈妈是蛮讲卫生的，但大便失禁也是没办法的。妈妈爱干净，我就不停的给她洗呀换的。因为她失禁后肛门皮肤很脆弱，每次只能用棉布给她擦屁股，然后清洗干净棉布，今晚折腾了五个多小时。已经是第二天了，我坐在妈妈的床上，没敢睡！　　
　　妈妈再虚弱，哪怕带着尿不湿，只要感觉大便出来了，她就要下床蹲便，她腹痛坠胀难受，大便早已因疾病原因不成型了。虽然很臭，但我已经习惯了，不觉得恶心。洗妈妈的棉布片，心里就想着小时妈妈给我洗屎片，一点心理障碍都没有，应该的。今晚不停的洗，然后用开水消毒，用了至少十几瓶开水，手都被洗皱了！可怜的妈妈，太遭罪了！　　
　　我的想法就是怎样能减轻妈妈的痛苦！　　
　　妈妈吐得厉害！今天元宵节，妈妈在医院放胸水！　　
　　祝福吧！病人这么痛苦，问问医生还有多久，用用激素，玛啡之类的如何　　
　　试试PARP抑制剂iniparib
　　现在医生叫禁食禁水，妈妈一直吐，没日没夜，痛苦呀！妈妈很想吃！
　　可以尝试CLS生物治疗。
　　肠梗阻治疗很困难！
　　@america-7 12:03:00　　你在百度上搜寻古巴药物“蓝蝎肽”，看看有没有帮助。如果需要咨询或者需要的话，可以联系我。我是古巴留学生。可以带回来。QQ:　　-----------------------------　　谢谢！
　　妈妈继续在吐，现在她很想吃东西，但喝水都吐！
　　妈妈脸颊都瘦变形了，两条腿水肿得厉害！可怜！心痛！
　　唉，我爸爸也是一样，双腿浮肿，瘦得我不忍心看。。
　　妈妈现在已经被医生要求禁食禁水一个多星期了，妈妈瘦的很快，皮子象风干了水分一样。妈妈现在想吃，看见什么都想吃，她说自己病好了，一定要好好吃！昨天还和爸爸抢吃的，太残酷了！昨晚爸爸说，妈妈又吐了一晚上，惨啦！
　　妈妈今天自己把针拔了，说要回家去，这样死得快些！太痛苦了，想吃又不能吃！
　　妈妈呼吸困难，吐黑水，酸臭！
　　看得难过！好好陪陪她。
　　妈妈现在上半身瘦成皮包骨，下半身水肿如巨人状，腿部还因水肿厉害渗出了水！惨啦！
　　昨晚在家做饭，做着做着就哭了，因为想起妈妈说好想吃东西，说等病好了要喝一罐子藕汤，吃两晚面条。妈妈是想吃不能吃呀，和活活饿死没两样！
　　妈妈呼吸困难，一直插着氧气！
　　尽力照顾吧。。。
　　这个时候她想吃什么，就给她吃吧！希望你的妈妈少受些痛苦！
　　妈妈开始吐血了！肠梗阻病人是禁食禁水的。　　
　　开始给妈妈打吗啡了！
　　妈妈一天一个样，很惨！吗啡也效果不大，因为她呼吸困难！
　　妈妈走了！　　
　　阿姨一路走好
　　节哀顺变！　　你们当子女的好好生活下去，在天堂的妈妈看到了，就会很开心的！
　　看着看着眼泪就止不住的流，想想自己也要这样的走掉，我的女儿也要这样的伤心难过。真不如早点了断了的好
　　看到最后眼泪流了出来　　阿姨走好，天堂再没有病痛
　　阿姨一路走好。这是自然规律，每个人即使没有得这个病，也只是早晚的时间而已。相信老天安排好一切，阿姨下辈子一定是幸福的。楼主，请你，一定坚强，你还有你自己的生活。
　　每天都会来看看你的妈妈！知道最后都是这样的结果，只希望你的妈妈少受些罪！　　阿姨，一路走好！
　　阿姨走好!楼主加油,人生还是要面对.　　共勉
　　今年母亲节妈妈左腹阵痛带她去医院检查，5-12检查结果出来，卵巢癌3期，腹水严重。医生说必须化疗两次后，看病人情况在决定手术，同时也明确我们手术意义不大??感觉天都塌了，
　　我的妈妈今年6.7确诊为卵巢癌IV期，医生告诉我没有做手术的意义，只能做化疗。怎么办？妈妈的生命就此要结束了吗？
　　@保持良好心态！去正规医院就诊，随着科学的进步，总有一天癌症也是可以治愈
　　@飘零的落叶cgr
09:02:00　　我的妈妈今年6.7确诊为卵巢癌IV期，医生告诉我没有做手术的意义，只能做化疗。怎么办？妈妈的生命就此要结束了吗？　　-----------------------------　　我妈妈也是这个时间确诊的，给我们的方案是化疗两次，条件成熟再手术
　　不幸的人为什么那么多？世间为什么要有这么折磨人的病？
　　痛心，希望能少点痛苦　　插播一下，利益相关　　现在患上癌症等重大疾病的概率越来越高，相对费用也可能彻底改变一个家庭的财政状况，趁身体健康时候即使投保重疾险非常重要。　　本人直属境外保险顾问，同等保额比国内价格低而且保障范围广，美金保单，欢迎咨询
　　走好，天堂再没有病痛
　　我妈妈62岁了，确诊卵巢癌三期C，今年7月初做手术，己切子宫及附近大网膜，除淋巴结，阑尾，7月中做了第一次化疗，化疗抽血各项指标正常。然后妈妈回去胃口一天比一天妈休息半个月长了4斤。全家看到这样挺高兴的，想不到8月份第二次化疗前CT显示盆腔淋巴结1.5C m，怎么办呢？妈妈你一定要好起来，我们和你一起加油
　　@芬芬爱妈妈
01:06:00　　我妈妈62岁了，确诊卵巢癌三期C，今年7月初做手术，己切子宫及附近大网膜，除淋巴结，阑尾，7月中做了第一次化疗，化疗抽血各项指标正常。然后妈妈回去胃口一天比一天妈休息半个月长了4斤。全家看到这样挺高兴的，想不到8月份第二次化疗前CT显示盆腔淋巴结1.5C m，怎么办呢？妈妈你一定要好起来，我们和你一起加油　　-----------------------------　　祝阿姨加油，最近的治疗情况怎么样？
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　　我妈妈去年9月份也是因为腹水去检查，卵巢癌已经是恶性肿瘤，属于晚期了，做了手术切除了子宫，癌细胞也扩散了，3月份第八次化疗结束，现在又复发了，又要再次化疗，我只是不知道我妈妈还能熬多久??，老天爷为什么要我妈妈受这种的罪，有谁懂的可以告诉我吗？
　　医生也怀疑我婆婆是卵巢癌晚期，还没有确认，但是所有的症状她都有了
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&卵巢癌晚期出现腹水，胸水，请问有办法治疗吗？
卵巢癌晚期出现腹水，胸水，请问有办法治疗吗？
发表时间： 08:03
2009年查出卵巢癌，在市二医院做切除手术
在二医院做手术后进行化疗6次，查血125指标正常。3个月后125指标有上升，又做了几次化疗，然后吃中药还是不行，又到中西医结合医院住院吃中药和化疗，也不行，又到省医院化疗，前后共化疗了30几次，身体越来越差，不能再化疗了。现在主要就是有腹水和了，在二医院住院抽水。进行了白介素2的注射，有，但少了，还是感觉不舒服。腹水越来越多，4天左右就会抽一次，每次1800左右。
解决腹水和的问题
汉中3201医院内科李曾：您好！从我们的治疗体会来看，目前治疗卵巢癌引起的胸腹腔积液，最有效的办法就是进行体腔循环热灌注化疗，这是一种持续恒温（42-45℃，每次约1小时）的治疗方法，这种方式对机体影响小，副作用不大，效果较好。不妨您到有该种治疗方法的医院就诊。详细情况可到本人网站看相关文章。
患者：你好李大夫，病人身体很弱了，能行吗？化疗5-6个疗程后，腹水和就没有了吗？还会几天就抽水吗？
汉中3201医院内科李曾：如果生命体征平稳，一般是能耐受该种治疗的。单纯进行抽腹水，而不进行针对性治疗，就会造成水，更会造成大量蛋白丢失，情况就会变得越来越差。
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发表于： 01:10
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肿瘤内科分类问答卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨-学路网-学习路上 有我相伴
卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨
来源：DOCIN &责任编辑：王小亮 &
卵巢癌患者性生活还能正常吗答：病情分析：你好，应该不会有太大影响的，不必过分担心，性生活时不要过于剧烈指导意见：建议您平时适当运动，增强自身免疫力，营养均衡，少吃生冷辛辣刺激性食物，避免劳累什么样的女人易患卵巢癌答：三十多岁的女人正处于一生之中最美好的时期，绝不会想到患癌症和死亡。然而，10%的卵巢癌是在40岁以前诊断的。卵巢癌是女性常见的妇科恶性肿瘤之一，其发生率仅低于宫颈癌、子宫内膜癌，在妇科恶性肿瘤中占第三位。由于卵巢深藏在盆腔内，即使长...卵巢癌晚期有哪些症状答：卵巢癌的发生率仅于宫颈癌、子宫内膜癌，在妇科恶性肿瘤中占第三位。据统计，60%~70%的病人因产生症状初诊时，已属晚期。因此，人们应及时发现卵巢癌亮出的黄牌警告。1、月经过少或闭经：多数卵巢癌患者无月经的变化。若卵巢正常组织均被癌细胞...卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨(图2)卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨(图4)卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨(图6)卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨(图9)卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨(图16)卵巢癌患者腹水exosome的来源及临床意义探讨(图20)卵巢癌的病人，化疗后已经正常人了。他的寿命大约...答：有效期为5年，一般半年到3年复发的占了85%以上。很少有人能撑过5年不复发的所以你的问题，没人能真正给出一个正确的答案。关键在调理，只要没有诱发的因素，可以撑很久防抓取，学路网提供内容。==========以下对应文字版==========卵巢癌分期是怎么分的？答：卵巢癌分期主要可分为以下四期，即第一期、第二期、第三期和第四期。根据患者卵巢癌分期的不同和患者自身状况的分别，治疗方法也是不同的。以下湖湘中医肿瘤医院专家简介卵巢癌各个分期的防抓取，学路网提供内容。中国协和医科大学（北京协和医学院）博士学位论文 卵巢癌患者腹水Exosome的来源及临床意义探讨 姓名：游燕 申请学位级别：博士 专业：临床医学 指导教师：沈铿
中文摘要 目的证实卵巢癌患者腹水中存在Ｅｘｏｓｏｍｅ，探讨其来源及临床意义。女性卵巢癌会遗传吗？答：警惕！卵巢癌也会遗传。卵巢癌是现代女性常见的一种妇科玻目前对卵巢癌的说法有两种，一种是遗传因素造成的，还有一种是环境因素造成的，这种原因造成的癌症是突发的。根据卵巢癌会遗传吗这个问题，大量资料证明，有卵巢癌发病的家族，发病的危...防抓取，学路网提供内容。方法（１）通过差速一蔗糖密度梯度离心从４１名晚期上皮性卵巢癌患 者的腹水中分离Ｅｘｏｓｏｍｅ，用负染电镜技术和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ技术进行 Ｅｘｏｓｏｍｅ鉴定即形态观察和分子标志检测；（２）用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和胶 体金免疫电镜技术检测Ｅｘｏｓｏｍｅ上的细胞特异性抗原，探讨Ｅｘｏｓ６ｍｅ 的来源；（３）分析腹水患者的临床特点，探讨Ｅｘｏｓｏｍｅ存在的临床 意义。卵巢癌癌患者可以吃蜂蜜吗答：当然可以，同时建议服用蜂王浆。活性冷冻蜂王浆保健用量每日2-4克或蜂王浆冻干粉1.0克，每日1次，早或晚服用均可。治疗用量可加大到每日10克（冻干粉3-4克），对于癌症和垂危病人不受此限。癌症患者：每天清晨服用蜂王浆25克左右、蜂蜜25克（...防抓取，学路网提供内容。结果８５．４％（３５／４１）晚期上皮性卵巢癌患者的腹水中存在直径 ５０．１５０ｎｍ的Ｅｘｏｓｏｍｅ，分子标志ＭＨＣ．Ｉ、Ｈｓｐ７０和ＣＤ８１阳性表达 率分别为１００％（３５／３５）、９１．４％（３２／３５）、８５．７％（３０／３５），电镜形态 学鉴定与分子标志检测的符合率为１００％（３５／３５）；这些Ｅｘｏｓｏｍｅ能 够表达免疫细胞表面抗原ＴＣＲ、ＣＤ２０、ＨＬＡ．ＤＲ、Ｂ７．２，肿瘤抗原 ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＣＡｌ２５，以及组蛋白Ｈ２Ａ；腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（＋）患者ＣＲＳ 术后ＣＡｌ２５平均下降幅度大于患者总体平均降幅（Ｐ＜０．０１）。卵巢癌大量腹水怎么办答：患者咨询：卵巢癌已化疗一年半，没好转。现在出现呼吸困难，肺部腹水严重，已是卵巢癌晚期，腹水抽取多次还是不间断出现，也曾多次灌药帮助缓解呼吸困难问题。患者主诉？专家解答：卵巢癌大量腹水应先抽取腹水，然后再进行对症治疗，包括手术切...防抓取，学路网提供内容。结论大多数晚期上皮性卵巢癌患者腹水中存在多细胞来源的 Ｅｘｏｓｏｍｅ，Ｅｘｏｓｏｍｅ的存在与ＣＲＳ后ＣＡｌ２５下降幅度有关，但与预 后的关系有待进一步研究。得了卵巢癌还能生育吗？答：得了卵巢癌还能生育吗是她们的心头大事。癌症专家指出，根据卵巢癌分类，不同类型的卵巢癌对于得了卵巢癌还能能生育吗的回答也是不同的：卵巢癌分类，可以分为几个常见的类型，即上皮性、防抓取，学路网提供内容。关键词Ｅｘｏｓｏｍｅ；卵巢癌；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ；免疫电镜；组蛋白；预后 中图分类号Ｒ７３７．３１ Ａｂｓｔｒａｃｔ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｏｒｉｇｉｎｏｆａｓｃｉｔｅｓ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｏｖａｒｉａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｅｘｏｓｏｍｅｓａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆｏｖａｒｉａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｓｃｉｔｅｓ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｏｎｓｕｃｒｏｓｅａｎｄＤ２０ｇｒａｄｉｅｎｔｓ ｆｒｏｍ４１ｏｖａｒｉａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｅｓ；（２）Ａｓｃｉｔｅｓ―ｄｅｒｉｖｅｄ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ ａｎａｌｙｓｅｓ ａｎｄｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｔｉｇｅｎｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ； ＵｓｉｎｇｓｔａｔｉＳｔｉｃｓ， ａｓｃｉｔｅｓ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｆｏｒｅｆｆｅｃｔｏｎ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｖａｒｉａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｒｅｓｕｌｔ Ｅｘｏｓｏｍｅｓｗｉｔｈｔｈｅｓｉｚｅｏｆ５０―１５０ｎｍｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｆｒｏｍｔｈｅａｓｃｉｔｅｓ ８５．４％（３５／４１）ｏｆｏｖａｒｉａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ；ＭＨＣ―Ｉ ｃｏｕｌｄ ａｓｃｉｔｅｓ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓｓａｍｐｌｅｓ，Ｈｓｐ７０ ９１．４％（３２／３５），ａｎｄＣＤ８１ ８５．７％（３０／３５）．Ｔｈｅｓｅａｓｃｉｔｅｓ―ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＨＬＡ―ＤＩ乙 Ｂ７－２，ＣＤ２０，ＴＣＲＨＥＲ２／ｎｅｕ，ＣＡｌ２５ ａｎｄＨｉｓｔｏｎｅ Ｈ２Ａ．Ｆｏｒｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈａｓｃｉｔｅｓ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓ，ｔｈｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆＣＡｌ２５ｌｅｖｅｌ ａｆｔｅｒＣＲＳｗａｓｍｏｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ． ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＭｏｓｔ ｏｖａｒｉａｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｈａｖｅ ａｓｃｉｔｅｓ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｓｓｅｃｒｅｔｅｄ ｃｅｌｌ，Ｂｃｅｌｌ，ＤＣａｎｄｔｕｍｅｒｃｅｌｌ． Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｏｓｏｍｅｓ ｏｖａｒｉａｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｎｅｅｄｓｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｅｘｏｓｏｍｅｓ，ｏｖａｒｉａｎｃａｎｃｅｒＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＨｉｓｔｏｎｅＨ２Ａ，ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ 卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤。exo新歌monster的mv是什么意思一开始伯贤和大家一起被敌方抓来的,后来伯贤单独离开想凭借自己的力量拯救大家,没有告诉任何人,这时候大家都拼命抵抗,然后抵抗就被拷打了,伤痕累累最,后大家都被扣上...防抓取，学路网提供内容。尽管几十年来，卵巢癌的诊断和治疗有很大进展，但患者的５年生存率并未得到明显改善，徘 徊在３０％－４０％。EXOluckyone歌词LuckyOne(ChineseVer.)-EXO韩文词:JQ/SeoLim(makeumineworks)/ChoiJinSun(makeumineworks)/Chang防抓取，学路网提供内容。进一步研究卵巢癌的生物学特性，探讨新的治疗方法 是提高卵巢癌患者生存率的主要研究方向“１。求EXO开路灿勋西皮王道文(西皮洁癖患者)开鹿,灿勋:《敌意(超经典)》《流氓与护士(欢脱的)》灿勋:《倒刺》《溃疡》《TimeMachine时光机》《郎骑竹马来》《还记得那时我们都太年少》《荼粼》《防抓取，学路网提供内容。因此，需要新的治疗方 法以杀灭化疗耐受的残余病灶。听说SM公司打过人,EXO-M被打过吗?sm打过sj的,M队的队员也有被打,比如鹿晗就有过,上次世勋没有敢和boa跳热舞,就被打,后来鹿晗顶替,原本不愿意,就被跪着打,那天他们在机场有粉丝不小心把鹿晗防抓取，学路网提供内容。近年来，抗原递呈细胞（ＡＰＣ）和肿瘤细胞分泌的小囊泡在肿瘤 模型中发挥的免疫刺激功能引起了人们的广泛关注嘲。关于EXO的网名Mlove丶EXOL°稀饭EXOgミ________EXO控//❀a苯菇酿f爱上了EXOEXO丶非你们不嫁‖a守护奇葩行星fEXO°∞太阳系...防抓取，学路网提供内容。Ｅｘｏｓｏｍｅ的发 现为肿瘤排斥抗原的交叉呈递提供了新的途径。exo招你惹你了?你凭什么骂他们的呢?论相貌,鹿晗是亚洲首帅...哎呀,童鞋,和那些不懂得欣赏的人说什么呢,只要我们坚持爱着他们,不脱饭就足够了,哥哥们都不生气,我们不能再给哥哥们添乱了哦~~~防抓取，学路网提供内容。Ｅｘｏｓｏｍｅ是活细胞的多泡体（ＭｖＢ）与细胞膜融合后释放到细胞 外环境中的脂质双层膜包裹的小囊泡，直径多在３０．１００ｎｍ，密度为 １．１３９／ｍｌ－１．１９９／ｍｌ。exo成员中哪个是中国的叫什么于2012年以EXO-M和EXO组合成员身份正式出道。日,SM正式宣布,公司在2015年3月为EXO主舞张艺兴(LAY)在中国成立工作室。张艺兴因此成为S防抓取，学路网提供内容。体外培养发现多种细胞都能产生Ｅｘｏｓｏｍｅ，包括Ｂ 细胞、Ｍ细胞、不成熟树突细胞（ＤＣ）、血小板、细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）、 纤维母细胞、上皮细胞、肿瘤细胞等曙１。exo上过的韩国综艺节目有哪些120417MBC《ShowChampion》EXO-K120424MBC《ShowChampion》EXO-K120511《THESTAR》采访EXO-K120515《防抓取，学路网提供内容。Ｅｘｏｓｏｍｅ中含有多种蛋白质， 且不同来源的Ｅｘｏｓｏｍｅ所含蛋白质种类亦不同。EXO参加过哪些综艺节目?日香港2012MENT亚洲音乐盛典EXO荣获亚洲最佳新人团体奖香港2012MENT亚洲音乐盛典EXO演唱《MAMA》香港2012MENT亚洲音乐盛典EXO防抓取，学路网提供内容。如ＡＰＣ来源的 Ｅｘｏｓｏｍｅ富于主要组织相容性复合体（ＭＨＣ）Ｉ、ＩＩ及共刺激分子，肿 瘤细胞源Ｅｘｏｓｏｍｅ富于Ｈｓｐ７０．９０分子伴侣，Ｔ细胞源Ｅｘｏｓｏｍｅ富含Ｔ细 胞上ＭＨＣ配体ＴＣＲ。exo吴亦凡为什么解约吴皇不是解约,他只是提出要修改一些合约中的内容,因为SM公司过于苛刻,不把成员们当人看,吴皇看不下去了!现在成员们身上大多都带着病,艺兴和钟仁的腰伤都成什么样了,...防抓取，学路网提供内容。Ｅｘｏｓｏｍｅ可以从一种细胞到达另一种细胞，在细 胞间转运ＭＨＣ．肽复合物、抗原或热休克蛋白一相关肽等多种分子，体 现了一种新的在免疫系统细胞间的通讯方式。防抓取，学路网提供内容。Ｅｘｏｓｏｍｅ可存在于血清、肺泡冲洗液、滤泡中心的ＦＤＣ上、精液、 前列腺液、恶性胸腹水中等‰钉。必须英雄联盟难啊！不要把手游的难度和端游来做比较，没有任何可别性的！那些扯什么王者荣耀难的，别逗我笑了，本人长期混迹于LOL一区白银，打王者荣耀目前没有一个赛季不在钻石以上。别说什么王者荣耀用户基数大防抓取，学路网提供内容。研究发现，卵巢癌患者的腹水中几 乎均有Ｅｘｏｓｏｍｅ的存在。一个男人一次可达1亿个精子甚至更多，那么如果只考虑生育的话，足够全世界十亿育龄女子用了。办法是稀释，然后给每个育龄女子做体外受精的试管婴儿。具体来说，要给未来的孕妇打排卵针，让其超数排卵，一次排出十个防抓取，学路网提供内容。目前，绝大多数Ｅｘｏｓｏｍｅ研究都基于体外的单一细胞培养，不能反映复杂的真实体内情况；而关于卵巢癌腹水中 Ｅｘｏｓｏｍｅ的文献报道甚少。　根据中怡康近期发布的OLED和QLED市场推广效果对比数据，不难看出，OLED在2016年后已经明显呈现倦态，QLED正在健康稳定的扎入市场。2013年1月上市的OLED电视，在三年时间内缓慢爬升至防抓取，学路网提供内容。卵巢癌腹水中Ｅｘｏｓｏｍｅ的来源及功能均不 明确，对免疫系统的效应不同实验结果相互矛盾哺～；它存在的临床 意义如何？对患者的治疗和预后有何影响？能否利用其免疫特性进 行卵巢癌的治疗？其作用机制又是什麽？――这些问题均没有明确 的答案，期待着进一步研究。育儿是一件综合了所有社会学科，汇集了各种问题，同时也提供了各种探索机会和创造了无限可能的，非常美好美妙的一件事情。如果说用海来形容，确实可以。因为“海纳百川”，育儿路上，只有想不到的，而没有遇不到的。从个人生涯成长的角度，这正是提供了一个“有容乃大”的机会。不断的发现问题，我们有了自己的探索能力、分析能力。不断的分析问题，我们有了自己的思考能力、挑战能力、策划能力。不断的解决问题，我们有了自己的学防抓取，学路网提供内容。我们的实验直接从卵巢癌患者的腹水中提取Ｅｘｏｓｏｍｅ，对卵巢癌 腹水中Ｅｘｏｓｏｍｅ的来源进行全面系统的研究。这个问题问得好，其实这是一个很大的话题，众人皆知的李小龙33岁去逝，霍元甲42岁去逝，黄飞鸿43岁去逝。如今的李连杰身体欠佳，很明显是与武术搏击有关联。任何事物，都有个“度”“分寸”，三百年前伏尔泰所防抓取，学路网提供内容。结合患者的临床资料， 初步分析Ｅｘｏｓｏｍｅ存在的临床价值，为进一步研究Ｅｘｏｓｏｍｅ在卵巢癌发 生、发展中的作用提供线索。感谢邀请。卫生间三分离需要至少6.2平方米的面积，以及要功能配合。如果你有这么大卫生间的条件，当然三分离是更舒适的。但是，因为你家只有一个卫生间，如果又有三个以上的家人，建议不要追求三分离，而要考虑怎防抓取，学路网提供内容。一、材料 材料和方法 （一）腹水标本、主要试剂及其配制 １．新鲜卵巢上皮性癌腹水标本来源于中国医学科学院北京协和医院、 中国医学科学院肿瘤医院及中国人民解放军总医院（３０１医院）。这个问题关注的点有些问题，如果不是冷冻区，而是放在冷藏区，这个事，首先应该想的是追责，而不是问什么东西不能放冰箱。不管是饮料还是什么，密封包装的液体，都不要往冷冻室里放。如果急于想喝冰水，有两种办法，防抓取，学路网提供内容。自 ２００６年３月至２００７年３月共收集卵巢上皮性癌患者腹水标本４１例。照片里缸中的辣椒并不辣，所以也只是看起来辣。至于吃的辣椒，只能说同样的红辣椒，有的辣有的不辣。辣的一个就能让人口腔红肿，胃痉挛。不辣的十个二十个都没事。而湖南人有多能吃辣？还真难说，只能说是湖南人普遍防抓取，学路网提供内容。卵巢癌患者年龄为３０岁－７７岁，平均为５５岁。最近不管是娱乐圈还是生活圈都是一个大写加粗的“忙”，从伴娘事件到酒店遇袭，女权问题分散了大把的流量。可今天的风向就有点奇怪了，一个叫徐璐的小姑娘突然窜上热搜，成功击败了众男星推荐的女子防身术~~都说人防抓取，学路网提供内容。其中初治者２９例， 复发１２例。你好，IT之家为你解答收音机的工作原理。收音机的作用是什么呢？接收来自广播电台的电波，并将其转化为人耳能够听到和辨识的声音。在说收音机是如何将无线电波转化为我们可听见、可辨识的声音之前，我们先来看看广防抓取，学路网提供内容。根据ＦＩＧＯ分期：ＩＩｃ期１例，ＩＩＩｂ期ｌ例，ＩＩＩｃ期３４例， 期５例。有湖南人说：“要知道大兵当年有多火完全可以参照现在在上海的周立波。”1996年湖南经济电视台开播，大兵和奇志在每期的《幸运3721》栏目里表演一段相声、一段双簧。之后，大兵和奇志便隔三岔五地在这个节目防抓取，学路网提供内容。病理分级：１级２例，２级９例，３级３０例。其实行为和心理是相互联系的，要改变心理就要改变行为。改变一下走了的习惯。经常给自己做暗示，特别是得意和失意的时候都要淡然处之，告诫自己这一切都会过去。另外要经常给自己做心理脱敏，特别是一些结果对你无关防抓取，学路网提供内容。病理类型： 浆液性囊腺癌３０例，子宫内膜样癌３例，透明细胞癌２例，粘液性 囊腺癌２例，移行细胞癌１例，小细胞癌１例，浆液性乳头状囊腺癌 ＋子宫内模样癌ｌ例，子宫内膜样癌＋透明细胞癌ｌ例。谈恋爱总是很难绕开一个魔咒――冷战。以前，个别爱作的妹子总喜欢用冷战去冰冻男友，企图让他明白一些事情。比如――我今天化了妆你居然看不出来？我生气你居然看不出来？我伤心难过你就你居然还像个没事人一样？现防抓取，学路网提供内容。以上患者在 腹水采集前４周内未接受过放化疗，并且ＨＢｓＡｇ、ＨＣＶ、ＨＩＶ及ＲＰＲ ４项感染指标均（一）。手机视频播放器的话，优酷，腾讯，爱奇艺也回避不了，所以凑活着用呗。手机端本地视频播放器还是MXplayer和VLC视频播放器这两个口碑好的最靠谱。题主只要随手搜一搜，试一试就知道为什么选它们。可能VL防抓取，学路网提供内容。２．３０％丙烯酰胺（北京普利莱基因技术有限公司） ３．Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’＿四甲基乙二胺原液，ＴＥＭＥＤ（北京普利莱基因技术 有限公司） ４．浓缩胶缓冲液――１ｍ０１／ＬＴｆｉｓ．ＨＣｌ缓冲液 Ｔｆｉｓ ６．０６９溶于４０ｍｌ双蒸水中，用浓ＨＣＩ调节至ｐＨ６．８，再加双 蒸水稀释至５０ｍｌ。说到林更新，想到的关键词是：辣条、游戏、王思聪，而且为了吃，让全世界都在偶遇他，逗逼本性也证明他是地地道道的东北人，每天在微博上就是一个“戏精”，对网友只有“我恨”。但认真起来的林更新，秒变偶像剧男主，也是帅到不行，将海澜之家都穿出了高定系列。这次是彻底改变了以前品牌的形象，瞬间变得很高档上，林更新的功劳是很大。七匹狼是中国男装开创性品牌，“男人不只一面”，一直以来的宣传照都是很大气，像张涵予的这防抓取，学路网提供内容。４。Ｃ保存。５．分离胶缓冲液――１．５ｍｏｌ／Ｌ＂Ｉｒｉｓ．ＨＣｌ缓冲液 Ｔｒｉｓ ９．０８９溶于４０ｍｌ双蒸水中，用浓ＨＣＩ调节至ｐＨ８．８，再加双 蒸水稀释至５０ｍｌ。你想问的是养什么龟，假如养普通的巴西龟、中国的乌龟，找个大一点的盆子，水刚漫过龟壳一半即可养活，要是养象龟的话可就难了，平常要买西红柿油麦菜给他吃，而西红柿又不能吃得太多，最重要的是，每天都要给他温水防抓取，学路网提供内容。４＂Ｃ保存。很明确回答！是！在现在这个社会，甲醛可以说是无处不在。不止房子装修会有甲醛，连购买的新家具也都带来了不少的甲醛。甚至衣服裤子，食品等等，你能想到的能接触到的几乎无一例外，只是或多或少的问题。总结一下：防抓取，学路网提供内容。６．１０％ＳＤＳ溶液 ＳＤＳ １０．０９，加双蒸水至１００ｍｌ。没有为什么，想让三傻除掉二丫？那是不可能滴，二丫也没空跟三傻争那破权利，雪诺才是三傻权力的阻碍，与其挑拨三傻和二丫，不如抹黑傻澹迦肥堤嗪诘悖判幸叭耍蛘矫煌纺裕兴灰舷缕舷拢≈竿贩雷ト。吠峁┠谌荨７．Ｔｒｉｓ一甘氨酸电泳缓冲液储液 Ｔｒｉｓ １５．１９、甘氨酸９４．０９、１０％ＳＤＳ ５０ｍｌ，加双蒸水至１０００ｍｌ， ｐＨ８．３。在众多中国人心中，人与玉石可以相互感应，因此常常把玉石用作护身平安符。而关于玉石的传说总是伴随着各种神秘的色彩，“人养玉三年，玉养人一生”已经成为了一个古老而又现代的问题每一个接触翡翠的人不管他是消费防抓取，学路网提供内容。临用前稀释５倍。实话告诉你，女生最好不要做这个专业，做平面设计比较好！为什么我不推荐女生学这个专业呢，一是这个室内设计师比较累，需要跑工地，跑材料市场，跟各种人打交道，工地是这样子的，女生就不能穿你可爱的裙子去上班了防抓取，学路网提供内容。８．１０％过硫酸铵（ＡＰ） ＡＰ Ｏ．１９，加双蒸水至ｌｍｌ。菠萝蜜又名苞萝、木菠萝、树菠萝、大树菠萝、蜜冬瓜、牛肚子果，隋唐时从印度传入中国，称为“频那挲”(梵文Panasa对音)，宋代改称菠萝蜜，沿用至今。是世界著名的热带水果，属桑科桂木属常绿乔木。菠萝蜜中防抓取，学路网提供内容。宜当天配制。想成为这个社会了不起的人，成为一个巨人，就需要时刻的学习，在我做互联网营销的过程中，我发现如果我学的越多，不断地对一个项目，对一个行业进行钻研的时候，会发现非常多的赚钱的机会。这个社会其实有很多的漏洞防抓取，学路网提供内容。９．样品缓冲液 ｌｍｏｌ／Ｌ ｐＨ６．８＂Ｉｒｉｓ ＨＣＩ缓冲液４ｍｌ、甘油６．４ｍｌ、１０％ＳＤＳ溶液 １２．８ｍｌ、０．０５％溴酚蓝１．６ｍｌ、双蒸水３６．０ｍｌ混合。不是怕黑猫过来，这是个长期的误解，在传统文化里有几样东西可以辟邪的，其中就有全黑的猫，叫玄猫，原来的门都是坐北朝南，人们都在门边放这样一只猫，据说玄猫视力极佳，可以看见传说中不干净的东西，所以它叫唤着防抓取，学路网提供内容。．８０＂Ｃ保存。俗话说物以稀为贵，何况是官方发行的法定货币，应该是具有权威性和公信力，不论官方是否认可，但这是事实，如当年官方发行的邮票(祖国山河一遍红)一样，今年在长沙一次拍卖会上，拍出四佰多万一张，所以说很有收藏防抓取，学路网提供内容。１０．中分子量预染蛋白Ｍａｒｋｅｒ（＃Ｐｌｌ１２，普利莱基因技术有限公司） １１．ｐ一巯基乙醇，Ｂ―ＭＥ（普利莱基因技术有限公司） １２．甲醇（北京世纪红星化工有限责任公司） １３．转移缓冲液 甘氨酸２．９９、＂Ｉｒｉｓ５．８９、ＳＤＳ０．３７９、甲醇１００ｍｌ，加双蒸水至 １０００ｍｌ。台上，他是游刃有余的湖南卫视当家主持，妥帖、老到，带来无数欢笑；台下，他是面面俱到有口皆碑的好男人，念佛、喝茶、看书、练字。他染尽人间烟火，却不为俗尘所扰；他向往散淡闲适，但仍有现世悲欢。时节正好，对汪涵来说，未来还在大路上。一个有情怀的娱乐及文化类节目主持人。热爱传统文化，传扬方言艺术，不会上网。反应很快，学识渊博，有个性，内敛却不失犀利，一张一弛显智慧。相对于大型晚会，他更适合小范围脱口秀节目防抓取，学路网提供内容。１４．洗涤液ＰＢＳＴ ＮａＨ２Ｐ０４０．４３８９、ＫＨｚＰ０４０．４９６９、Ｎａ２ＨＰ０４２．５１９、ＮａＣＩ８．７６９， 加双蒸水至１０００ｍｌ，即得０．０１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．２ＰＢＳ。来来介绍一些自己收集的株洲特色，口味佳的店。有些店没有名字只有地点，这些店分布株洲各地，口味是经过时间考验的。最长的店有20年的历史。南环线上土口味店株洲也有家牛逼的神店；无招牌，南环线边上稀烂的2层防抓取，学路网提供内容。临用前加Ｔｗｅｅｎ２０， 制成含０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０的ＰＢＳＴ。恋物癖是通过异性物品获得性兴奋和快感的一种性变态，这类特质的人无法将自己的性取向定位于完整的异性，而是对异性穿着的物品感兴趣，如女性的胸罩、内裤、长裤袜、高跟鞋等，为了获得满足，常常偷盗女性用品，内心防抓取，学路网提供内容。１５．封闭液――５％脱脂奶粉 新鲜脱脂奶粉５．Ｏｇ溶于１００ｍｌＰＢＳＴ中。首先现在电视机整个行业的确不行，但是主要是低端电视机在国内不受欢迎，高端机仍受到青睐。如大屏、4K和量子点电视、互联网电视在上半年销量都是逆势增长的。例如去年创维4K智能电视机于国内市场的销售量同比增防抓取，学路网提供内容。临用前配制。最满意的首先是价格，毕业工作没多久的我来说。全靠自己买了房，现在才圆梦自己人生中第一辆小车可能相比其他人晚了一些。不过310总体给我的满意大于不满意。其次是空间，说实话外观看起来很小，乘坐空间还是够用防抓取，学路网提供内容。１６．超敏发光液（北京普利莱基因技术有限公司） １７．显影粉、定影粉（天津市亨达公司感光材料厂） １８．ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ膜再生液（北京普利莱技术有限公司） １９．４％多聚甲醛一０．３％戊二醛固定液 多聚甲醛粉末４．０９，加双蒸水５０ｍｌ，放在三角烧瓶中８０。Ｃ水浴， 摇动至溶化呈乳白色时，加１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ３－４滴，搅拌至溶液透明清 澈；冷却后过滤，加Ｏ．２ｍｏｌ／ＬＰＢ ５０ｍｌ，测ｐＨ７．４．７．６。４。Ｃ保存。临用前加２５％戊二醛溶液（ｐＨ＞４．０），使其终浓度为Ｏ．３％。２０．３０％蔗糖－０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ溶液 蔗糖３．Ｏｇ，加Ｏ．Ｉｍｏｌ／ＬＰＢＳ至１０ｍｌ，充分溶解后调节ｐＨ７．４―７．６。４。Ｃ保存。２１．５％ＮａＢＨ４溶液 ＮａＢＨ４ ５．０９，加０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ至１００ｍｌ，调节ｐＨ７．４―７．５。宜临用 前配制。２２．羊血清（杭州四季青公司） ２３．１％四氧化锇 将４支四氧化锇安瓿（共２９）用肥皂水洗净，再用清洁液浸泡 过夜，自来水冲洗干净后，用玻璃划割器刻痕，再用蒸馏水冲洗几次， 放入洁净棕色广口玻璃瓶内，加双蒸水１００ｍｌ，用力摇破安瓿，即得 ２％四氧化锇贮存液。４。Ｃ保存。临用前，将等量的０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢ或双蒸水与２％四氧化锇贮存液 混合。２４．无水乙醇（北京试剂化学公司） ２５．包埋剂――低黏度Ｓｐｕｒｒ环氧树脂（ＳＰＩ―ＣＨＥＭ公司） ＶＣＤ（二氧乙烯环六烷） １０．０９ ＤＥＲ７３６（聚丙烯乙二醇二丙基乙醚） ６．０９ ＮＳＡｔ－ｔ－一烷基琥珀酸酐） ２６．０９ ＤＭＡＥ（二甲氨基乙醇） Ｏ．４９ 前３种成分充分混合后，再加催化剂ＤＭＡＥ。临用前配制。最满意的首先是价格，毕业工作没多久的我来说。全靠自己买了房，现在才圆梦自己人生中第一辆小车可能相比其他人晚了一些。不过310总体给我的满意大于不满意。其次是空间，说实话外观看起来很小，乘坐空间还是够用防抓取，学路网提供内容。２６．第一抗体 兔抗人ＭＨＣＣｌａｓｓＩ（Ｈ．３００）、ＣＤ８１（Ｈ．１２１）、Ｎｅｕ（Ｃ．１８）、 ＨＬＡ．ＤＲａ（ＦＬ．２５４）、Ｂ７．２（Ｈ一２００）、ＴＣＲａ（Ｈ．１４２）多克隆抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ生物技术公司） 兔抗人抗Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０多克隆抗体（Ｓｔｒｅｓｓｇｅｎ生物试剂公司） 兔抗人ＣＤ２０多克隆抗体（ＮｅｏＭａｒｋｅｒｓ公司） 兔抗人ＨｉｓｔｏｎｅＨｚＡ多克隆抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ公司） 兔抗人卵巢癌抗原（ＣＡｌ２５）多克隆抗体（北京博奥森生物技术 有限公司） ２７．第二抗体 羊抗兔ＩｇＧ一辣根过氧化物酶（ＨＲＰＯ）偶联物（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ生物 技术公司） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金标记物１０ｎｍ（北京赛驰生物科技有限公司） （二）耗材和仪器 １．Ｗｈａｔｍａｎ３ＭＭ滤纸（英国Ｗｈａｔｍａｎ公司） ２．０．４５Ｉ＿ｔｍＰＤＶＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司） ３．柯达Ｘ．ＯＭＡＴＢＴ胶片（柯达公司） ４．ＡＬ２０４型电子天平（梅特勒一托利多仪器上海有限公司） ５．Ｘ射线摄影暗盒（汕头市粤华医疗器械厂有限公司） ６．２Ｋ３８０型低温离心机（ＨＥＩ洲ＬＥ公司） ７．ＢＥＣＫＭＡＮＬＫ．８０型超速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公 ８．ＤＹＣＺ．２４Ｄ双垂直电泳仪（北京市六一仪器厂）９．ＢＤＦ．１６００型双恒电泳仪（北京东方仪器厂） １０．半干式转移印迹系统（ＨｏｅｆｅｒＳｅｍＰｈｏｒ公司） １１．微量加样器（Ｇｉｌｓｏｎ公司） １２．恒温水浴箱（浙江余姚工业仪表二厂） １３．ＴＳ．１型脱色摇床（江苏海宁市其林贝尔仪器制造有限公司） １４．超低温冰箱（美国ＲＥＶＣＯ公司） １５。４＂Ｃ冰柜（江苏白雪电器股份有限公司） １６．台式高速离心机（上海安亭科学仪器厂） １７．８５．２型恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂） １８．ＦＲ．２００．３００型手压封口机（温州鹿城松山焊接设备厂） １９．恒温培养箱（北京亚太实验器材有限公司） ２０．解剖显微镜（麦克奥迪实业集团） ２１．ＬＥＩＣＡＥＭＴＲＩＭ修块机（莱卡仪器有限公司） ２２．超薄切片机（莱卡仪器有限公司） ２３．ＪＥＭ．１００ＣＸＩＩ透射电镜（日本电子） 二、方法 （一）腹水标本采集 腹水采集方式为床旁引流或术中收集。每例腹水标本量主要取决 于患者自身的腹水量，约５００．２０００ｍｌ不等。腹水采集后立即分装至 ５００ｍｌ干燥、洁净玻璃瓶中４。Ｃ保存，并于７２ｈ内进行Ｅｘｏｓｏｍｅ提纯。取自我院西院、肿瘤医院及３０１医院的患者腹水均以冰盒转运。（二）Ｅｘｏｓｏｍｅ提纯 在４。Ｃ低温条件下，采用差速离心一蔗糖密度梯度离心法从卵巢 癌患者腹水中提纯Ｅｘｏｓｏｍｃ。１．初步离心：腹水标本经３００９离心１０ｍｉｎ去除细胞得到上清，再依 次经８００９离心３０ｍｉｎ、１００００９离心３０ｍｉｎ去除细胞碎片及大分子 蛋白质，收集上清液。２．高速离心：初步离心所得上清液经１０００００９离心ｌｈ进一步去除标 本中小分子物质，得沉淀并将其悬浮于０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ中，加入 ３０％蔗糖一Ｄ２０溶液至离心管下１／５一ｌ／４处；再１０００００９离心１ｈ， 留管底缓冲垫，加入０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ充分混匀；最后经１０００００９离 心１ｈ，收集管底沉淀即为提纯的Ｅｘｏｓｏｍｅ。（三）提纯后Ｅｘｏｓｏｍｅ的处理 根据不同实验技术所需，立即将提纯所得的Ｅｘｏｓｏｍｅ沉淀分为 不等量３部分，分别进行如下处理。１．负染滴网法电镜观察：取微量Ｅｘｏｓｏｍｅ沉淀悬浮于约ｌＯＯｔｄ Ｏ．Ｏｌｍｏｌ／ＬＰＢＳ中，制成Ｅｘｏｓｏｍｅ－ＰＢＳ悬液，４保存，４８ｈ内用 于形态学观察。２．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术：将从５００ｍｌ腹水中提纯的Ｅｘｏｓｏｍｅ沉淀悬浮于 ｌｍｌ Ｏ．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ中，制成Ｅｘｏｓｏｍｅ．ＰＢＳ悬液，．８０保存。３．免疫电镜技术：浸泡固定法 （１）Ｅｘｏｓｏｍｅ沉淀小块（＜ｌｃｍ３）依次浸入４％多聚甲醛－０．３％戊二醛 溶液４８ｈ－７２ｈ、４％多聚甲醛８ｈ，４＂Ｃ固定。（２）０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ浸洗１０ｍｉｎｘ４。（３）将Ｅｘｏｓｏｍｅ固定块置于适量３０％蔗糖－０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ溶液中，４ 保存。图１．Ｅｘｏｓｏｍｅ提纯及提纯后处理流程图 （四）Ｅｘｏｓｏｍｅ的鉴定 采用电镜形态观察和分子标志检测相结合的方法对卵巢癌患者 腹水标本进行Ｅｘｏｓｏｍｅ鉴定。首先在电镜下观察标本中是否存在符 合Ｅｘｏｓｏｍｅ形态学特征的囊泡结构。然后，对电镜形态学符合的标 本进行ＭＨＣ―ｌ、Ｈｓｐ７０和ＣＤ８ １三种Ｅｘｏｓｏｍｅ标志性抗原的检测；证 实任一标志性抗原存在，则认为该份标本中存在Ｅｘｏｓｏｍｅ。１．负染滴网法观察Ｅｘｏｓｏｍｅ电镜标本 滴１５山Ｅｘｏｓｏｍｅ．ＰＢＳ悬液于载样铜网上，室温静置ｌｍｉｎ，用滤 纸从侧面吸干液体，滴加醋酸双氧铀液体约３０９ｌ于铜网上，室温负 染１ｍｉｎ，滤纸吸干负染液，白炽灯下烤干约２０ｍｉｎ，将铜网放入透射 电镜载物杆上，抽真空后观察并照相。２．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法定性检测Ｅｘｏｓｏｍｅ分子标志ＭＨＣ―Ｉ、Ｈｓｐ７０和ＣＤ８１ （１）１２％分离胶（１０ｍ１）的配制： ｄＨ２０ ３．３ｍｌ ３０％丙烯酰胺溶液４．０ｍｌ １．５Ｍ Ｔｆｉｓ（ｐＨ８．８） ２．５ｍｌ １０％ＳＤＳ Ｏ．０５ｍｌ １０％过硫酸铵 ０．１ｍｌ ＴＥＭＥＤ ０．００４ｍｌ （２）迅速混合后，灌入制胶板，用带针头的注射器小心在其上方覆 盖一层ｄＨ２０。（３）室温３０ｍｉｎ后，待分离胶聚合完全，倒去水层，用ｄＨ２０冲洗 凝胶顶部数次，吸干胶面的水。（４）５％浓缩胶（３ｍ１）的配制： ｄＨ２０ ２．１ｍｌ ３０％丙烯酰胺溶液０．５ｍｌ １．０Ｍ Ｔｒｉｓ（ｐＨ６．８） Ｏ．３８ｍｌ １０％ＳＤＳ ０．０５ｍｌ １０％过硫酸铵０．０３ｍｌ ＴＥＭＥＤ ０．００３ｍｌ （５）迅速混匀，灌入分离胶上方，立即插入ＴＥＦＬＥＮ梳子，继续灌 胶充满梳子间的空隙。（６）室温３５－４０ｍｉｎ后浓缩胶聚合完全，拔出梳子，ｄＨ２０冲洗加样 孔数次。（７）将凝胶板固定于电泳槽，内外槽中加入ｌＴｒｉｓ一甘氨酸电泳缓冲 液，没过凝胶顶部，小心去除玻板下所有气泡。（８）分别取Ｅｘｏｓｏｍｅ－０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ悬浊液１２１ａｌ，加入５Ｘ样品缓 冲液（其中含１０％１Ｂ―ＭＥ），沸水浴加热５ｍｉｎ后１３０００ｒｐｍ离心 ５ｍｉｎ，取上清加样。预染蛋白Ｍａｒｋｅｒ不加热。（９）按序上样，除预染蛋白Ｍａｒｋｅｒ上样量为１０１ａｌ，其余每孔上样量 为１５１ａｌ，空孔加等量样品缓冲液。（１０）浓缩胶电压８０Ｖ，进入分离胶后提至１２０Ｖ，电泳约２．５ｈ，至 溴酚蓝染料指示剂前沿移至凝胶末端ｌｃｍ处，即停止电泳。（１１）电泳结束后，切除浓缩胶，测分离胶大小，将胶浸在转移缓冲 液中平衡３０ｍｉｎ。（１２）取胶大小的ＰＶＤＦ膜，在甲醇中浸１５ｓ，膜多呈半透明，然后 放入ｄＨ２０浸泡２ｍｉｎ，再放入转移缓冲液中平衡１５ｒａｉｎ（至少 ５ｍｉｎ）。（１３）取胶大小的滤纸６张，于转移缓冲液中浸泡至少３０ｓ。（１４）在阴极板中央依次铺上３张滤纸、凝胶、ＰＤＶＦ膜、３张滤纸， 再将阳极板盖上。（１５）以恒流０．８ｍＡ／ｃｍ２进行电转移９０ｍｉｎ。（１６）转膜结束后，将ＰＶＤＦ膜置于含５％脱脂奶粉的ＰＢＳＴ中４’Ｃ 封闭过夜。（１７）ＰＢＳＴ洗膜５ｍｉｎｘ３。（１８）依说明书，用ＰＢＳＴ稀释一抗、二抗：抗Ｈｓｐ７０／Ｈｓｃ７０多克隆 抗体稀释１：８００００倍，ＭＨＣ．Ｉ和ＣＤ８１多克隆抗体均稀释１：２００ 倍；ＨＲＰＯ―ＩｇＧ偶联物稀释１：５０００倍。（１９）ＰＶＤＦ膜放入盛有稀释一抗的塑料袋中，密封好，室温摇床３ｈ。（２０）取出ＰＶＤＦ膜，ＰＢＳＴ振摇洗膜５ｍｉｎｘ３。（２１）ＰＶＤＦ膜放入盛有稀释二抗的塑料袋中，密封好，室温摇床２ｈ。（２２）取出ＰＶＤＦ膜，ＰＢＳＴ振摇洗膜５ｍｉｎｘ３。（２３）用超敏发光液浸润ＰＶＤＦ膜３０ｓ．６０ｓ。（２４）吸干多余液体，将ＰＶＤＦ膜封闭在保鲜膜中，置于Ｘ射线摄 影暗匣中。（２５）在暗室中，胶片放入暗盒，并立即扣紧盒盖。曝光时间一般数 秒至数分钟。（２６）曝光结束后，取出胶片，依次放入显影液、定影液，最后清水 漂洗，晾干保存。（五）Ｅｘｏｓｏｍｅ表达抗原的检测 采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和胶体金标记免疫电镜技术，对电镜形态观察 和分子标志检测结果阳性的６例Ｅｘｏｓｏｍｅ标本进行７种来源相关特 异性抗原的定性检测，探讨卵巢癌腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ可能的来源及功能。表１．７种细胞特异性抗原列表 细胞类型 特异性抗原 Ｂ细胞 ＤＣ Ｔ细胞 肿瘤细胞 凋亡小体 ＣＤ２０ Ｂ７．２ ＨＬＡ．ＤＲ ＴＣＲ－ａ链 ＨＥＲ２／ｎｅｕ ＣＡｌ２５ ＨｉｇｏｎｅＨｚＡ １．Ｗｓｅｓｔｅｍｂｌｏｔ法 具体步骤同“（四）２”。依说明书，一抗稀释倍数为：Ｂ７－２、ＨＬＡ－ＤＲ、ＴＣＲ－ａ链和Ｎｅｕ 多克隆抗体１：２００，ＣＤ２０多克隆抗体１：４００，ＨｉｓｔｏｎｅＨ２Ａ多克隆抗体 １：１０００。２．包埋前胶体金标记免疫电镜技术 （１）从３０％蔗糖一０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ液中取出Ｅｘｏｓｏｍｅ固定块，切割成若 干约０．Ｓｍｍ３的小块。（２）清洗 Ｏ．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ摇洗５ｍｉｎ３。５％ＮａＢＨ。摇洗２０ｍｉｎ。０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ摇洗５ｍｉｎ Ｘ３。（３）封闭 以６％羊血清封闭非特异性抗原ｌｈ。（４）抗原抗体反应 以Ｏ．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ稀释一抗，７种抗体见表ｌ。参照说明书，除兔 抗人ＣＤ２０多克隆抗体稀释１：４００倍，其余６种抗体均稀释１：５０ 将Ｅｘｏｓｏｍｅ小块浸入一抗稀释液中，室温摇床使Ｅｘｏｓｏｍｅ与一抗充分接触后，４。Ｃ过夜。０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ摇洗５ｍｉｎ３。将Ｅｘｏｓｏｍｅ小块浸入１：５０稀释的羊抗兔ＩｇＧ胶体金标记物溶液， 室温摇床使Ｅｘｏｓｏｍｅ与胶体金充分接触后，４＂Ｃ２ｄ。Ｏ．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ摇洗１０ｒａｉｎ３。（５）后固定 Ｅｘｏｓｏｍｅ小块浸入２％戊二醛１０ｍｉｎ，摇床。０．１ｍｏｌ／ＬＰＢ摇洗５ｍｉｎｘ４。Ｅｘｏｓｏｍｅ小块浸入１％四氧化锇２ｈ，密封、抽气台，转盘摇振。Ｏ．１ｍｏＵＬＰＢ摇洗５－１０ｍｉｎｘ３。（６）脱水 依次浸入５０％、７０％、８０％、９０％酒精各１０ｍｉｎ，转盘摇振。依次浸入１００％酒精及丙酮各１５ｍｉｎ ２，转盘摇振。（７）浸透与包埋：包埋剂为低黏度Ｓｐｕｒｒ树脂 Ｅｘｏｓｏｍｅ小块浸入无水丙酮与包埋剂ｌ：１混合液，转盘摇振４ｈ后， ４。Ｃ过夜。浸入纯包埋剂４ｈ，转盘摇振，并置于白炽灯照射下。先在多孔橡胶膜板的孔中滴一滴包埋剂，用牙签将Ｅｘｏｓｏｍｅ小块 挑入孔中，并注满包埋剂。膜板放入恒温培养箱，依次经３７＂Ｃ２４ｈ、６０。Ｃ４８ｈ聚合。（８）修块一手工修块 将已聚合的环氧树脂包埋块放入专用的样品夹中，在解剖显微镜 下用单面刀片修去其顶端和组织周围多余的包埋介质，呈金字塔形 （四面锥体形）。（９）超薄切片 切片厚度约８５ｎｍ，用捞片法将切片收集到覆膜的３ｍｍ铜网上。（１０）超薄切片染色――醋酸铀一枸橼酸铅双染法 带有切片的铜网依次浸入醋酸铀１５ｍｉｎ、枸橼酸铅５ｍｉｎ，最后以 双蒸水漂洗。（１１）透射电镜观察并拍照。（１２）对照组：每例卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ标本均设一同步对照组， 对照组不入一抗稀释液，仅与羊抗兔ＩｇＧ胶体金反应。（六）患者临床资料收集 查阅４ｌ例晚期上皮性卵巢癌腹水患者的病历，记录如下内容： （１）病理诊断； （２）ＦＩＧＯ分期； （３）术前、术后ＣＡｌ２５水平； （４）手术彻底性； （５）血ＣＡｌ２５下降满意率： ＣＡｌ２５下降满意，即ＣＲＳ后化疗１疗程血ＣＡｌ２５水平等于或低 于术前５０％，或者化疗２疗程后血ＣＡｌ２５水平降至正常； （６）对化疗的敏感性： 化疗敏感性，即初次采用以铂类为基础的化疗并已获得经临床证 实的缓解，停药超过６个月出现复发病灶。化疗耐药性，即初次化疗有效但在完成化疗后６个月内出现复 发，或初次化疗无明显缓解、肿瘤进展。（七）统计学方法 采用ＳＰＳＳ１４．０统计软件对数据进行分析。组间资料比较用ｔ检 验，两样本率的比较用ｘ２检验，Ｐ＜０．０５认为有统计学意义。一、Ｅｘｏｓｏｍｅ的鉴定 （一）负染滴网法观察Ｅｘｏｓｏｍｅ电镜形态１．负染色电镜下卵巢癌患者腹水中Ｅｘｏｓｏｍｅ的主要形态特点： （１）为脂质双层膜包围的小囊泡结构； （２）腔内呈密度较均一的高密度区，未见细胞器； （３）多呈近圆形或近椭圆形； （４）囊泡大小不一，直径多在５０．１５０ｒｉｍ，最小者约３０ｒｉｍ，大者可 达２００ｒｉｍ； （５）小囊泡可以分散存在，也可以成团聚集。图２．卵巢癌腹水标本的Ｅｘｏｓｏｍｅ电镜照片（负染法，透射电镜） 标尺＝２００ｒｉｍ ２．在４１例卵巢癌患者腹水标本中，３５例电镜形态观察证实Ｅｘｏｓｏｍｅ 存在，阳性率为８５．４％。（二）Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法定性检测Ｅｘｏｓｏｍｅ分子标志 对３５例电镜形态观察结果阳性的Ｅｘｏｓｏｍｅ．ＰＢＳ悬液标本进行 ＭＨＣ－Ｉ、Ｈｓｐ７０和ＣＤ８１三种分子标志的定性检测。结果显示每例标 本至少表达一种Ｅｘｏｓｏｍｅ标志性抗原，见图３；其中ＭＨＣ．Ｉ表达阳 性率为１００％（３５／３５），Ｈｓｐ７０阳性率为９１．４％（３２／３５），ＣＤ８１阳性 率为８５．７％（３０／３５）。图３．Ｅｘｏｓｏｍｅ分子标志ＭＨＣ―Ｉ、Ｈｓｐ７０和ＣＤＳＩ在６例卵巢癌患 者腹水标本中的表达（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ定性检测） 结合上述形态学观察和分子标志检测结果，认为８５．４％（３５／４１） 卵巢癌患者腹水标本中存在Ｅｘｏｓｏｍｅ。二、Ｅｘｏｓｏｍｅ表达抗原的检测 对上述Ｅｘｏｓｏｍｅ电镜形态符合且任一分子标志表达阳性的６例 卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ标本进行７种来源相关性抗原的定性、定 位检测。１．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ定性检测 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，Ｔ细胞特异性抗原ＴＣＲ、Ｂ细胞特异性 抗原ＣＤ２０、ＤＣ标志性抗原Ｂ７－２和ＨＬＡ－ＤＲ、肿瘤细胞标志性抗原 Ｎｅｕ及凋亡小体标志性抗原ＨｉｓｔｏｎｅＨｅＡＬ在卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ 标本中均有表达。其中，ＴＣＲ、ＣＤ２０、ＨＬＡ－ＤＲ和ＨｉｓｔｏｎｅＨ２Ａ阳性 表达率为１００％（６／６），见图４；Ｂ７－２和Ｎｅｕ阳性表达率为８３．３％（５／６）， 见图５。图４．ＴＣＲ、ＣＤ２０、ＨＬＡ－ＤＲ和ＨｉｓｔｏｎｅＨｚＡ在６例卵巢癌患者腹水 Ｅｘｏｓｏｍｅ标本中的表达（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ定性检测） 图５．Ｂ７－２和Ｎｅｕ在６例卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ标本中的表达 （Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ定性检测） ２．胶体金免疫电镜法定性、定位检测 （１）同步对照组（未加一抗） 电镜下见卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ直径多在５０．１００ｒｉｍ，大者 １５０ｎｍ；呈圆形或椭圆形的双层膜囊泡结构，腔内为较均一的低电子 密度成分；多聚集成堆，见图６。Ｅｘｏｓｏｍｅ周围可见断裂的膜结构， 以及成片分布的絮状或纤维样物质；偶见多泡体（ＭｖＢ）、吞噬泡和 小线粒体（约５００ｐｍ）。Ｅｘｏｓｏｍｅ外膜上、腔内及Ｅｘｏｓｏｍｅ外均未见胶体金标记。由此 说明，无一抗存在条件下ＩｇＧ胶体金不会与Ｅｘｏｓｏｍｅ标本非特异性 结合。图６．同步对照组Ｅｘｏｓｏｍｅ电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电镜） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金１０ｎｍ （２）７种来源相关性抗原的抗体胶体金标记 电镜下见经免疫电镜标记的Ｅｘｏｓｏｍｅ双层膜上有一个或多个高 电子密度、圆形、界限清楚且大小均一的标记物；标记物在Ｅｘｏｓｏｍｅ 外膜上分布不均，可能散在或聚集出现，聚集成团时数量可达２０―３０ 个，并覆盖整个Ｅｘｏｓｏｍｅ；Ｅｘｏｓｏｍｅ外未见上述标记物存在，即胶体 金颗粒仅特异性结合于Ｅｘｏｓｏｍｅ的双层膜上。电镜观察结果显示卵巢癌患者腹水中Ｅｘｏｓｏｍｅ可以被Ｔ细胞、Ｂ 细胞、ＤＣ、肿瘤细胞及凋亡小体的标志性抗原对应的抗体一ＩｇＧ胶体 金标记，其中ＴＣＲ标记、ＣＤ２０标记和ＣＡｌ２５标记的阳性率为１００％ （６／６），见图７－９；Ｂ７―２标记、ＨＬＡ－ＤＲ标记和髓Ｉｔ２／ｎｅｕ标记的阳 性率为８３．３％（５／６），见图１０－１２；Ｈｉｓｔｏｎｅ１４２Ａ标记的阳性率为６６．７％ （４／６），见图１３。图７．ＴＣＲ－ｏ链标记免疫电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电镜） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金１０ｎｍ 图８．ＣＤ２０标记免疫电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电镜） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金１０ｒｉｍ 图９．ＣＡｌ２５标记免疫电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电镜） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金１０ｎｍ 图１０．Ｂ７―２标记免疫电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电镜） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金１０ｎｍ 图１１．ＨＩ．Ａ－ＤＲ标记免疫电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电镜） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金１０ｎｍ 图１２．Ｎｅｕ标记免疫电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电镜） 羊抗兔ＩｇＧ胶体金１０ｒｉｍ 图１３．ＨｉｓｔｏｎｅＨＡ标记免疫电镜照片（包埋前胶体金标记，透射电 镜）羊抗兔ｋＧ胶体金１０ｎｍ 综合上述Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和胶体金免疫电镜结果，认为来源于Ｔ细 胞、Ｂ细胞、肿瘤细胞和凋亡小体的７种标志性抗原在晚期上皮性卵 巢癌患者的腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ上均有表达，但不同患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ表 达的抗原种类存在差异，见表２。这种差异可能与患者间不同临床表 现相关，见表３。表２．６例卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ表达抗原的检测结果 注：ａ．ＷＢ＝Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ，ＩＥＭ＝Ｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ。ｂ．ＣＡｌ２５未进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测。表３．６例卵巢癌患者的临床特征 三、Ｅｘｏｓｏｍｅ与上皮性卵巢癌的关系 运用统计学方法分析Ｅｘｏｓｏｍｅ的存在与晚期上皮性卵巢癌预后 影响因素之间的关系。结果显示，Ｅｘｏｓｏｍｅ在年龄大于５０岁患者组 的阳性率为８３．３％，低于５０岁以下组的９０．９％；在病理类型为浆乳癌 患者组的阳性率为８３．９％，低于透明细胞或小细胞癌组的９０．０％；在 组织学２级组的阳性率为６６．７％，低于３级组的９０．Ｏ％；在肿瘤切净 组的阳性率为８４．６％，低于未切净组的８６．７％；在ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５ 下降满意组的阳性率为８１．８％，低于ＣＡｌ２５下降不满意组的８９．５％。但上述两组间的腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ阳性率均无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５），见 腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（＋）卵巢癌患者ＣＲＳ前后血ＣＡｌ２５平均水平分别为３７５３ｕ／ｍｌ、１６０９ｕ／ｍｌ，高于腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（一）患者平均水平 １３２９ｕ／ｍｌ、４４０ｕ／ｍｌ，亦高于整体平均值３３１３ｕ／ｍｌ、１３９７ｕ／ｍｌ。但如表 ５及图１４所示，各组数据分布很离散，所以平均值不一定能够代表 真实的ＣＡｌ２５水平。此外，腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（＋）患者ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５ 平均下降水平为２１４４ｕ／ｍｉ，高于腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（一）患者的８９０ｕ／ｍｌ， 及整体平均值１３９７ｕ／ｍｌ；腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（＋）患者ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５ 平均下降幅度为６５．９７％，高于腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（一）患者的３６．６１％，并 且显著高于整体平均降幅６０．６３％（Ｐ＜０．００１），见表５。表４．卵巢癌腹水中Ｅｘｏｓｏｍｅ与病人预后的关系 注：ａ．本表Ｐ值：Ｉｃ者为Ｆｉｓｈｅｒ精确概率检验，其余均为Ｘ２检验。ｂ．共３４例卵巢癌患者完成初次化疗；其余７例中５例正在进行 初次化疗，２例未化疗。表５．卵巢癌腹水患者ＣＲＳ前后血ＣＡｌ２５水平变化情况 注：ａ．血ＣＡｌ２５值和下降幅度均以“平均值标准差”表示。ｂ．共总结３３例卵巢癌患者ＣＲＳ后ＣＡｌ２５变化情况；其余８例 病历资料不全（非初治）。ｃ．若患者行先期化疗，则在化疗完成２周后测定ＣＲＳ前血ＣＡｌ２５ 水平；术后１周、初次化疗前测定ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５水平。图１４．晚期上皮性卵巢癌腹水患者ＣＲＳ前后血ＣＡｌ２５变化情况 鉴于腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（＋）卵巢癌患者的ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５降幅与 整体降幅之间的显著性差异可能与手术彻底性有关，以下按照瘤灶切 净与否进行分组分析，见表６。在瘤灶切净组中，腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（＋） 患者的ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５平均下降幅度为７７．４４％，显著高于整体降幅 ７４．４３％（Ｐ＜０．００１）；在瘤灶未切净组中，腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ（＋）患者的 ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５平均下降幅度为６１．１４％，亦显著高于整体降幅５４．５６％ （Ｐ＜０．００１）。表６．不同瘤灶切净度的ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５下降幅度 注：ａ．本表Ｐ值均为单一样本ｔ检验，血ＣＡｌ２５值和下降幅度均以 “平均值标准差”表示。ｂ．共总结３３例卵巢癌患者ＣＲＳ后ＣＡｌ２５变化情况；其余８例 病历资料不全（非初治）。Ｃ．若患者行先期化疗，则在化疗完成２周后测定ＣＲＳ前血 ＣＡｌ２５水平；术后１周、初次化疗前测定ＣＲＳ后血ＣＡｌ２５ 水平。一、Ｅｘｏｓｏｍｅ的鉴定 本文首次报道８５．４％（３５／４１）的晚期上皮性卵巢癌患者腹水中存在Ｅｘｏｓｏｍｅ。Ｅｘｏｓｏｍｅ鉴定方法是目前最普遍采用的电镜形态观察＋ 分子标志检测。１．Ｅｘｏｓｏｍｅ的形态 自１９８７年Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ首先将网织红细胞释放的小囊泡命名为 Ｅｘｏｓｏｍｅ以来，对于Ｅｘｏｓｏｍｅ电镜形态的最经典描述为脂质双层膜 包围的扁平球体，呈特征性的杯状外形，腔内为较均一的低密度成分， 无细胞器结构泌１。直径多在３０．１００ｎｍ，Ｂ细胞来源者大小较一致 （６０．８０ｎｍ）州。Ａｎｄｒｅ等通过差速离心和蔗糖／Ｄ２０密度梯度离心法 从３名卵巢浆乳癌患者的腹水中提取到具有上述特征的小囊泡结构， 直径在５０．１００ｎｍ之间阳１。本实验采用同样的方法从３５例晚期上皮性 卵巢癌腹水中提取到具有相似形状、结构的小囊泡，但直径变化范围 更大，在５０．２００ｎｍ之间（图２）。考虑这一不同结果主要与标本制 各方法不同有关。以往研究大多采用常规透射电镜标本制备技术，并 基于此总结出Ｅｘｏｓｏｍｅ的形态特点。而本实验采用负染色技术，其 操作简便、快速，样品制成悬液，使小囊泡处于ｐＨ７．４．７．６的液态环 境中，并且不需经过固定、脱水、包埋、高温聚合等步骤，故认为用 此法观察到的电镜形态更接近体内生理条件下的真实情况。Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ 等用负染色技术对口腔肉瘤细胞系ＰＣＩ．１３来源和ＤＣ来源的小囊泡 进行电镜形态比较，结果显示肿瘤来源的小囊泡体积更大，直径为 １００．２００ｎｍ者居多‘埘。２．Ｅｘｏｓｏｍｅ的分子标志 依据以往的体内外实验结果，本研究确定ＭＨＣ．Ｉ、Ｈｓｐ７０和ＣＤ８１ 为Ｅｘｏｓｏｍｅ的标志性抗原。体外实验表明，Ｈｓｐ７０存在于网织红细胞、 树突细胞和肿瘤细胞来源的Ｅｘｏｓｏｍｅ；ＭＨＣ．Ｉ广泛存在于包括树突细 胞、Ｂ细胞、Ｔ细胞和肿瘤细胞在内的大部分类型细胞源性Ｅｘｏｓｏｍｅ； 而ＣＤ８１属于Ｅｘｏｓｏｍｅ中含量最丰富的蛋白家族――四跨膜蛋白 （ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ，ＴＳ），在所有类型细胞的Ｅｘｏｓｏｍｅ中都大量存在啼１。Ｂａｒｄ等运用蛋白组学方法在９名晚期癌症病人（包括１名卵巢腺癌 患者）胸水Ｅｘｏｓｏｍｅ标本中检测到ＭＨＣ．Ｉ和ＨＳＰ。Ａｎｄｒｅ等用 ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ和胶体金免疫电镜技术证实ＭＨＣ．Ｉ、ＣＤ８１和Ｈｓｐ７０在 卵巢癌、黑色素瘤、皮肤癌等不同肿瘤患者腹水的Ｅｘｏｓｏｍｅ上广泛 存在；９５％的Ｅｘｏｓｏｍｅ可被ＣＤ８１抗体．胶体金标记，６０％的Ｅｘｏｓｏｍｅ 可被ＭＨＣ．Ｉ抗体．胶体金标记嘲。本实验Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果显示，ＭＨＣ．Ｉ、Ｈｓｐ７０和ＣＤＳｌ在 晚期上皮性卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ上的阳性表达率分别为１００％、 ９１．４％、８５．７％。并且电镜形态学鉴定与分子标志检测的符合率为 ｌＯＯ％。二、Ｅｘｏｓｏｍｅ的细胞来源 现已知多种细胞均可向胞外释放Ｅｘｏｓｏｍｅ，并且不同细胞来源的 Ｅｘｏｓｏｍｅ具有不同蛋白成分。对于人类，Ｅｘｏｓｏｍｅ已被发现存在于体 外培养的人正常细胞和肿瘤细胞上清液、血浆以及不同疾病患者的其 它体液中“１“２１。Ｂａｒｄ等通过蛋白组学鉴定推测恶性胸水中的Ｅｘｏｓｏｍｅ 可能来源于Ｂ细胞、Ｔ细胞、树突细胞和肿瘤细胞等多种细胞叫。Ａｎｄｒｅ 等用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法分别在黑色素瘤患者、卵巢癌和乳腺癌患者的腹 水Ｅｘｏｓｏｍｃ标本中检测到Ｍａｒｔｌ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ，因此认为这些患者腹水 中的Ｅｘｏｓｏｍｅ可能大多来源于腹膜或胸膜肿瘤细胞【棚。Ｔａｙｌｏｒ等同样 采用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法在６名卵巢浆乳癌患者的腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ标本中检 测到一种特异性表达于生殖细胞肿瘤和合体滋养层的卵巢癌相关质 膜酶――胎盘型碱性磷酸酶ＰＬＡＰ，它的存在提示腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ可能 来源于肿瘤细胞哪。本研究采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结合胶体金免疫电镜技术，对６例经过 形态学和分子标志鉴定的晚期上皮性卵巢癌患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ标本 进行较为全面的细胞来源分析。胶体金免疫电镜技术是一种将电镜形 态学和免疫技术相结合的研究方法，能够在超微水平上定位、定性及 半定量的显示抗原。较之ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ技术，该方法能够在电镜下直 观地看到抗原抗体特异性结合位点，但对于抗原检测的灵敏度不及前 者。本实验之所以联合上述两种方法对患者腹水Ｅｘｏｓｏｍｅ标本进行７ 种来源相关的标志性抗原检测，是为了在高效检出Ｅｘｏｓｏｍｅ表达抗 原的同时，避免标本中非Ｅｘｏｓｏｍｅ成分造成的假阳性结果，为卵巢 ．３７． 癌患者腹水中Ｅｘｏｓｏｍｅ来源的推断提供更可靠、有力的依据。此外， 本实验采用包埋前免疫电镜技术，即先对标本进行免疫标记，然后进 行包埋、超薄切片。较之包埋后免疫电镜技术，该技术的优点在于抗 原活性保存相对好，抗原暴露充分，因此标记的阳性率高且非特异性 反应少；免疫标记完毕后用戊二醛和锇酸再次固定，可使抗原抗体结 合更加牢固，并有利于膜结构的保存。１．免疫细胞表面抗原 ＴＣＲ是Ｔ细胞表面特有的标志分子，特异识别由ＭＨＣ分子提供 的抗原肽。ＣＤ２０是一种仅表达于Ｂ细胞各种前体细胞和成熟Ｂ细胞 表面的膜分子，浆细胞不表达ＣＤ２０。它可能通过调解跨膜钙离子流 动，而直接对Ｂ细胞起作用，在Ｂ细胞增殖和分化中起重要的调节 作用。ＨＬＡ．ＤＲ和Ｂ７－２（ＣＤ８６）作为抗原递呈细胞表面分子，在Ｔ细胞 双重信号活化过程中起着至关重要的作用。ＨＬＡ．ＤＲ是ＭＨＣ．１１分子 最主要的抗原类型，能够将加工后的抗原肽以抗原肽：ＭＨＣ―ＩＩ复合物 的形式呈递给ＣＤ４＋Ｔ细胞，提供Ｔ细胞活化的第一信号。正常情况下， ＭＨＣ．１１分子仅在专职ＡＰＣ和活化的Ｔ细胞中表达，上皮组织中不表 达。但ＨＬＡ．ＤＲ在乳腺癌、结肠癌、鼻咽癌等多种癌组织中均有表达 ｎ３’１４１。研究显示ＨＬＡ．ＤＲ在上皮性卵巢癌患者的肿瘤细胞中异常表达， 并且与预后正相关，因此认为ＨＬＡ．ＤＲ可能是癌症发生和预后相对良 好的标志ｎ田。Ｂ７．２是重要的协同刺激分子，在激活的Ｂ细胞、单核细 胞、树突状细（ＤＣ）、巨噬细胞上呈高水平表达，在静止的单核细 胞和Ｂ细胞上也有低水平表达。它在启动免疫应答时可能起决定作用， 通过与Ｔ细胞表面相应受体结合提供第二信号，协同刺激ＣＤ４＋Ｔ细胞 向Ｔｈ２分化。肿瘤组织的ＤＣ表面常缺乏Ｂ７分子，导致Ｔ细胞无能或凋 亡，不能产生机体免疫应答，从而使肿瘤逃避机体的免疫监视、免疫 制裁ｎ司。此外，Ｂ７．２还能提高Ｂ细胞活性ｎ订。体外实验显示，专职ＡＰＣ来源的Ｅｘｏｓｏｍｅ都富于ＭＨＣ―１１分子， ＤＣ来源的Ｅｘｏｓｏｍｅ含有Ｂ７．２，Ｔ细胞来源的Ｅｘｏｓｏｍｅ大量表达卵巢癌晚期还能活多久问：女43岁来自健康咨询描述：我阿姨一辈子都身体这里那里的不舒服，所以...答：你好，应该积极的治疗，看原发肿瘤大小，可先化疗2程，腹水消退后再手术。晚期卵巢癌也有至少40%的机会活过5年甚至长期存活查看原帖&&卵巢癌的病人，化疗后已经正常人了。他的寿命大约...答：有效期为5年，一般半年到3年复发的占了85%以上。很少有人能撑过5年不复发的所以你的问题，没人能真正给出一个正确的答案。关键在调理，只要没有诱发的因素，可以撑很久卵巢癌分期是怎么分的？答：卵巢癌分期主要可分为以下四期，即第一期、第二期、第三期和第四期。根据患者卵巢癌分期的不同和患者自身状况的分别，治疗方法也是不同的。以下湖湘中医肿瘤医院专家简介卵巢癌各个分期的不同之处。更多卵巢癌问题请点击在线咨询一、卵巢癌分期...
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