母亲O型RhD阳性抗筛试验阴性新生儿a型b型生o型RhD阳性直抗试验阴性游离抗体弱阳性,是溶血吗

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新生儿溶血病三项试验在临床中的应用
发布时间: 13:47:46
来源:创新医学网
浏览次数:773次
新生儿溶血病(HDN)是有一种因胎儿红细胞表面抗原与母亲体内相应免疫抗体结合出现免疫反应造成新生儿出现溶血的免疫疾病[1]。HDN 发病与母亲体内IgG
血型免疫抗体种类和胎儿红细胞表面抗原密切相关[2]。本研究通过回顾性分析溶血病患儿的HDN
血型检测结果及血清三项试验阳性结果对其进行探讨,现将报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料 采集2010年12月到2012年12月本院母婴室和新生儿科高胆红素血症患儿血标本400份。患儿出生1~10d,其中男性236
例,女性164 例。所有患儿在性别、年龄、病情等方面比较差异无统计学意义(p&0.05)。1.2 仪器与试剂 微柱凝胶卡:江阴力博医药生物技术有限公司提供ABO/RhD 血型定型检测试剂卡。ABO
试剂红细胞:合肥晨光医疗用品有限公司提供的人ABO 血型反定型用红细胞试剂盒。1.3 方法1.3.1 血型鉴定[3] 患儿及其父母ABO/Rh 血型采用新生儿及父母亲抗凝血做ABO/Rh血型鉴定。1.3.2 ABO HDN 检测[4] 直接试验:取新生儿溶血病检测卡1张,滴加患儿3%红细胞悬液50μL
后在专用离心机中离心8min。离心后,取出检测卡观察后判定结果并记录。游离试验:取新生儿溶血病检测卡1张,前3孔分别标记A、B、O 三种血型。将A、B、O
三种血型的标准红细胞50μL 加入对应孔中。放散试验:结合试剂盒说明书进行操作处理红细胞后,先后将患儿放散液50μL 和A、B、O 红细胞悬液试剂50μL
加入游离试验所用微柱凝胶卡的4~6孔。37 ℃恒温孵育10min,离心6min后取出观察结果。1~3 孔为游离试验结果,4~6孔为放散试验结果。1.4 疗效评定标准[5?6] 观察试验结果时,直抗试验,游离和放散试验均以检测出红细胞分布在微柱上端或凝胶中为试验结果阳性,若红细胞离心后附着在微柱底部为阴性。其中,游离试验和放散试验均以在微柱凝胶中检测出与新生儿红细胞相结合的抗体为阳性,并以此为确诊标准。若放散试验检测结果为阴性,且直抗试验或游离试验中有任意一种为阳性则结果为疑似ABO
HDN。三项试验检测均为阴性则,排除ABOHDN。1.5 统计学处理 采用SPSS18.0
软件进行统计学处理,计数资料采用卡方检验,计量资料狓±狊表示,计量资料采用狋检验,以p&0.05为差异有统计学意义。2 结  果2.1 患儿HDN 血型检测结果 400例新生儿中,患儿血型分类为A 型和B 型的分别有240 例(56.25%)、135
例(33.75%),Rh型血为25例(6.25%)。2.2 血清三项试验阳性结果 400 例新生儿中共54 例确诊为HDN,其中A 型血35例,B
型血16例及Rh型3例对应血型比例为14.58%、11.85% 及12.00%,差异有统计学意义
(p&0.05)。血清三项试验中游离抗体试验呈阳性的为27例(25.71%),放散试验呈阳性的为69例(65.72%),直接抗人球蛋白试验阳性为9例(8.57%)。2.3 确诊患儿血清三项试验结果 400例高胆红素血症患儿中,54例确诊为HDN,总阳性率为13.5%。其中,直抗试验和游离抗体试验均阴性12例(22.22%),仅游离试验阴性14
例(25.93%),仅直接抗人球蛋白试验阴性21例(38.89%),三项者均阳性7例(12.96%)。3 讨  论HDN
为临床造成新生儿死亡的一大重要原因,可导致胎儿出现发育停滞、畸形、流产及新生儿高胆红素血症[7]。其主要发病机制为患儿与母亲血型不合,造成母体免疫系统产生抗体与患儿红细胞表面抗原相结合,致使新生儿出现红细胞凝集并破裂出现溶血。HDN
可破坏患儿体内红细胞,增加肝脏和脾脏负担,导致患儿出现肝脾肿大、黄疸等症状。同时,患儿在溶血过程中失去红细胞,血液供氧能力降低,其供氧无法满足自身生理功能正常运转,出现缺血性贫血、发育迟缓等症状。若溶血继续发展恶化,将引起胎儿畸形、死胎、流产等严重后果。对新生儿进行早期HDN
检查,尤其是血清三项指标试验可较高程度的检测出新生儿发生HDN 的情况,有利于临床对新生儿的诊疗和提高新生儿存活率[8]。HDN
发病率在很大程度上与患儿血型和母亲血型相关。有研究显示,我国HDN 发病率在母亲为O 型血、胎儿为A 型血或B型血时最高[9?10]。此外,Rh
血型系统中出现HDN 的比例一般在15% ~20%,且D 抗原在其发病总数中占多数[11]。临床诊疗中,通常以母亲血清IgG 抗A 及IgG 抗B
效价大于或等于64为判断是否可能引起HDN 的标准。当效价大于或等于128时,HDN
发生率明显增高,对新生儿的健康造成较大威胁[12]。此时较大可能引起新生儿黄疸、死胎等,应适当选择药物以降低孕妇血清抗体效价,保证母婴健康。本研究中,新生儿直接抗人球蛋白试验阳性例数仅为9
例(8.57%),游离抗体阳性例数为27
例(25.71%),差异有统计学意义(p&0.05),表明其体内存在抗体,但并不一定致敏出现溶血。与相关研究中直抗试验阳性和游离试验阳性疑似HDN
相符。直接抗体试验阳性或放散抗体试验阳性中任何一个均可确诊,但只有可直接反映致敏红细胞状况的释放抗体试验阳性才可保证诊断可靠性。近年来,随着母婴血型与HDN
发病率的关系研究成果不断更新,HDN 的检测方法日趋完善。利用机体IgG 抗A(B)效价状况,通过Rh系统与ABO 系统对HDN
可能性进行诊断将更加准确。此外,本研究结果显示54例HDN患儿血型检测结果中,A 型血35例,B型血16例及Rh型3例对应血型比例为14.58%,11.85%
及12.00%(p&0.05)。这说明,在高胆红素血症新生儿中,A 型血患儿发生HDN 的概率明显较B型血患儿和Rh 型血患儿高,且B 型血患儿出现HDN
概率相对较低。综上所述,本研究中共54
例确诊为HDN,总阳性率为13.5%(54/400),其中仅直接抗人球蛋白试验阴性和三项者均阳性分别为占38.89%和12.96%(p&0.05)。表明新生儿血清三项检测对新生儿溶血病诊断具有重要意义,直接抗人球蛋白试验阳性结果是区别ABO
和Rh 溶血病的重要标志。同时,A 型血患儿发生HDN 的概率明显高于B 型血患儿,可根据患儿与母亲血型做出相应防治措施,对于临床关于新生儿HDN
的诊疗和防治具有重要意义。参考文献[1] 龙跃兵,朱伟斌,章美燕,等.溶血对生化检验结果准确性的影响及校正方法的探讨[J].广东医学,):.[2] 贾波,靳十周,李晓雪,等.标本溶血对ABO 和Rh血型鉴定的影响[J].中国输血杂志,):.[3] 梁惠强,牛映红,梁佩婵,等.溶血因素对血清蛋白电泳结果的影响分析[J].现代预防医学,):939?940,947.[4] 熊丽红,苗燕平,何华庆,等.溶血致血浆报废原因分析及对策[J].中国输血杂志,):148?149.[5] Salvadori
M.Updateonhemolyticuremicsyndrome:diagnosticandtherapeuticrecommendations[J].WorldJ
Nephrol,):56?76.[6] 陈海斌,梁业宾,黄慧嫦,等.标本溶血对电化学发光免疫法结果的影响[J].检验医学,):651?653.[7] 汪洪美.丙种球蛋白联合光疗治疗新生儿ABO 溶血的护理[J].护士进修杂志,):648?649.[8] 王进,金静芬.外周静脉不同采血方法对急诊血标本溶血的影响[J].中华护理杂志,):848?851.[9] 杨芸洁,甄志军,齐文娟,等.不同溶血程度标本对速率法检测ALT 结果的影响[C].中国输血协会第六届输血大会论文集,2012:95.[10]SarperN.Mildhemolyticanemia,progressiveneuromotorretarda?tionandfataloutcome:adisorderofglycolysis,triose?phosphateisomerasedeficiency[J].TurkJPediatr,):198?202.[11]丁晶,刘捷,曾超美,等.足月新生儿贫血发生时间及影响因素的研究[J].中国妇幼保健,):.[12]孙黔云,叶巧玲,闫银萍,等.小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的新方法[J].中国药理学通报,):.(收稿日期:)
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  广西壮族自治区妇幼保健院输血科广西530000
  【摘要】目的: 了解新生儿溶血病(HDN)发病情况、分析溶血三项检测试验的重要性。方法: 对2012年4月~2013年8月广西区妇幼保健院448例母婴血型不合、高疸血症病例的临床资料进行回顾性分析。结果: 448例患儿中排除HDN6例,确诊ABO-HDN392例,可疑56例,总阳性率875%,不同试验阳性率比较有显著差异(P&o.05),不同日龄患儿组间阳性率有显著差异(P&001)。 结论:& 溶血三项试验是新生儿溶血病的可靠诊断依据。ABO-HDN在出生后0一2 d组高发于其他组别,且随着时间的延长其检出率逐渐降低。
  【关键词】ABO 血型不合;新生儿溶血病;溶血三项试验
  【中图分类号】[R5566+3]【文献标识码】B【文章编号】13)08-0258-01
  &&新生儿溶血病 (HDN)[1]是由于母婴血型不合,母亲体内产生的 IgG 血型免疫抗体通过胎盘进入胎儿体内,使胎儿红细胞破坏。临床上以ABO-HDN较为多见, 血型血清学检查能为新生儿溶血病患儿的换血和治疗提供依据,现就对本院448 例新生儿黄疸患儿进行了溶血三项检测现报告如下。
  1资料与方法
  11一般资料:  2012年4月~2013年8月本院新生儿母婴血型不合、高胆血症患儿448 例,日龄0~41d,男 226 例,女222例;O-A型194例,O-B型228例,O-O型6例。
  12 试剂与仪器:  抗-A、抗-B、抗-D血清试剂、ABO标准红细胞由上海血液生物医药有限公司提供;微柱凝胶卡、DiaCidel 放散试剂、37℃孵育器、卡式离心机均为DiaMed公司生产。
  13方法:  标本进行ABO和Rh血型鉴定及溶血三项试验,具体操作参照文献[2]。HDN的检验诊断标准:母婴血型不合,新生儿血浆和(或)红细胞放散液中检出了可致敏新生儿红细胞的血型抗体者可诊断为HDN,以抗体放散试验为最终诊断标准。
  14统计学分析:&&&& PEMS31软件进行分析,P<001有统计学意义。
  2 结果
  21448例患儿中排除HDN6例,可疑55例,RH系统1例,确诊ABO溶血病392例,总阳性率875%,其中三项试验均为阳性44例(995%);②+③阳性157例(3552%);①+③阳性9例(204%),单项③阳性175例(394%),单项②阳性1例(023%);不同试验阳性率比较有显著差异(P&o.05),见下表1
  表1& 442例新生儿溶血三项试验结果(n,%)
&&&&&&& 23出生后1h~2d组共送检332例,确诊HDN为302例,阳性检出率9096%(302/332),占总数组6833%(302/442),直抗试验阳性46例,游离试验阳性173例,放散试验阳性298例;3~4d组送检60例,确诊52例,阳性检出率为8667%(52/60),占1176%(52/442,直抗试验阳性4例,游离试验阳性17例,放散试验阳性55例;5~6d组送检21例,确诊18例,阳性检出率为8571%(18/21),占407%(18/442),直抗试验阳性2例,游离试验阳性2例,放散试验阳性20例;&6d组送检29例,确诊20例,阳性检出率为6897%(20/29),占452%(20/442),直抗试验阳性1例,游离试验阳性3例,放散试验阳性19例.见下表2
  临床HDN以ABO-HDN为常见,而ABO-HDN中,母婴血型O/A和O/B组合最为多见。本组试验中IgG类抗-B抗体较 抗-A抗体多可能与当地人血型比例有关。临床上当母婴血型不合时,胎儿红细胞被母亲抗体包被,红细胞被大量破坏,代偿后未成熟的网织红细胞和有核红细胞进入循环,临床症状和体征有水肿 、黄疸 、贫血和肝脾肿大,黄疸深者可能并发核黄疸并有生命危险。临床上患儿黄疸出现较早,一般在24h以内,发展迅速,血清胆红表以非结合胆红表增高为主,部分患儿黄疸较轻,与生理性黄疸相似,因而实验室血型血清学检测结果是临床及时对新生儿溶血病做诊疗的重要依据,而溶血三项试验(直抗、游离试验、抗体释放试验)中抗体释放试验是新生儿溶血病的确诊试验。本组试验发现HDN的检出率与患儿出生时间有很大关系,即患儿出生时间越短,检测阳性率越高,以出生后O~2 d组的检测阳性率为最高。这是因为在发病24 h内抽样检测。新生儿血液中还有较多的游离IgG血型抗体及致敏红细胞存在。随着发病时间的延长,新生儿血液中只有少量的游离IgG血型抗体及致敏红细胞存在,而大部分IgG血型抗体以抗原抗体复合物的形式存在,失去了反应原性,导致检出率降低。抗体放散试验敏感度高、特异性强,是判定HDN的最有力的证据[3]。血清游离试验可能由于进入胎儿体内的IgG抗体数量较少,且被红细胞表面的抗原所结合,血清中的游离抗体量不足导致检测结果为阴性,特别在出生后较长时间,所以其检出阳性率低于放散试验。而直抗试验则可能因为抗原抗体亲和力弱,洗涤过程中抗体被洗脱(主要是ABO血型系统),使得反应强度较弱。在HDN的诊断中,应加强对抗体放散试验的操作,以便得到准确可靠的实验结果。
  表2 442例高疸病患儿日龄、血型与三项实验结果分析[n(%)]
&&&&&&& 总之溶血三项检测在新生儿溶血病诊断中具有重要意义[4],其中以释放试验难度较大,实验中应注意放散时的温度 、放散液的量 、离心转速和时间等,确保实验的准确性。临床上应结合产妇的抗体效价试验进行早期观察,并且在产后48h内及时对有症状的患儿进行溶血三项试验,及时早期发现并治疗新生儿血液病,以提高患儿生活质量。
  参考文献
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  [2] 达庄.免疫血液学[M].上海:上海科学出版社,,224.
  [3]高峰.输血与输血技术[M].北京:人民卫生出版社,2103.
  [4]焦立新,林乾飞,鞠瑞静,等.538例新生儿溶血三项检查及抗体鉴定分析[J].):901902
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