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（求助）关于检测阳性后进行亚克隆的时间
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这个帖子发布于10年零117天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
融合后十天左右检测，检测后第二天将阳性孔中的杂交瘤细胞进行有限稀释，但是做了几次后，效果不好，杂交瘤细胞没有生长，都死掉了。后来就现将阳性孔中的细胞转入新的96孔板里，待其生长一段时间后在做有限稀释，效果还是不好，细胞还是无法生长，都死了。请问，这是怎么回事呀，烦死了，辛辛苦苦免疫的，融合的也很好，阳性也还不错，就是这里有问题
野原 edited on
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为什么没有人回答我呀
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不知您有限稀释时孔里的单克隆长了多大？我自己做单抗的经验是：⑴融合后约5天时补一次培养基，以防挥发和细胞消耗造成液体及营养成分过少；⑵待单克隆长至孔面积的1/2~2/3时检测（您10天左右就有限稀释，好象太早了点），若为阳性克隆，再将其有限稀释。你的细胞总死可能因为克隆还太小、细胞生长还不稳定。一点小体会，仅供参考。
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实际上融合后的克隆长到四分之一个视野时就可以做克隆化了，我们是按每孔1.5个~2个来算，先在孔里铺上饲养细胞，再进行细胞计数铺板，一般没问题。
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是融合的问题吧，或者有限稀释可以改成梯度稀释，会好一些
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【求助】WB阳性细胞亚克隆转阴ELISA为阳性
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这个帖子发布于2年零222天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我的融合板为全阳ELISA,WB检测阳性细胞为百分之八十，然后做亚克隆并转24孔培养，但是转出的24孔里的细胞再做WB转阴了，亚克隆的板子elisa值有几个阳性的在1.3至1.6之间，其中有个单集落有大约50个细胞elisa为1.3，做WB居然全为阴性，是什么原因？怎么处理啊？第一次做，求各位高手指点啊？急。急 急。。。。
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实验重做，支原体污染。
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你好，我想问一下这种情况的支原体污染有什么特点啊？还有，我筛了两株二亚的全板WB阳性了，但是条带很浅，有什么办法补救？
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实验重做，支原体污染。你好，我想问一下在哪个步奏开始支原体污染的。？
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【求助】亚克隆细胞为何会死亡
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这个帖子发布于8年零220天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教单抗高手：细胞在亚克隆后，第五天观察时发现，有约十来个细胞聚集在一起（很象小克隆），但是细胞边缘破损，可见到细胞内的颗粒样物质，且已经死亡。我开始时怀疑是原来的细胞状态不佳，后就重新选择状态较好的阳性孔，进行亚克隆。仍然如此。我原以为是亚克隆没有加入巨嗜细胞的原因，就再次亚克隆，第五天时还是出现细胞死亡，且现象同前。如果说，细胞状态不好的话，就不该有小克隆出现：如果说，细胞状态好的话，出现细胞克隆又该继续生长下去。奇怪啊！我不知道原因何在？
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请问你是第几次亚克隆？如果是首次，要考虑培养液更换的问题，我们实验室的经验一般首次亚克隆要由HAT换为HT；其次要考虑换液，你一般多长时间换液？再就是你培养箱的状况是否有所变动。如果已经克隆几次才出现这个问题，首先看你原液孔细胞长势如何？如正常，至少原液孔未污染。再考虑你此次亚克隆所用液体是否与以前相同，或更换厂家或重新配制。都排除了那很可能是污染，支原体或衣原体污染的可能性大。以上是我一点看法，希望对你有所帮助。
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谢谢fande战友!我是从原始孔转移至24孔后，进行亚克隆的。培养基为一批配制的100ml 10%生长液，临用前加入100*HT；我一般亚克隆后就放在培养箱中，直到第五天 才去看它，期间也不换液；培养箱一直状况良好；原始孔状态也不错，就是每次检测时读值不断下降，从最初的1.0以上，下降到至今0.4左右。我好怕读值下降啊！
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这种情况首先考虑的是培养基的问题，还有就是你的HT是不是已经过了使用期，还有你24孔板所用的培养基血清浓度，如果是18％，不要直接将对10％，最有可能的应该是HT！GOOD LUCK!
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你说的原始孔是融合孔吗？是首次亚克隆吧？用的血清浓度是不是有些偏低？我们一般血清浓度在20%左右，还有就是你加双抗吗？ 同意蓝天战友的意见，你可看看HT是否有问题
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我的也是细胞慢慢死亡，而且效价由2.5降到1.3，检测培养基都没问题，求助
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亚克隆不就是骨髓瘤细胞吗，体外可以无限生长呀，为什么会死亡？？
关于丁香园（遗传学专业论文）耐热碱性磷酸酶的亚克隆和耐热机制的研究研究,与,克隆,遗传学专..
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（遗传学专业论文）耐热碱性磷酸酶的亚克隆和耐热机制的研究
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3秒自动关闭窗口有限稀释(有限稀释,单抗,亚克隆,阳性)
01:58:00&&&来源：&&&评论：&&
[有限稀释(有限稀释,单抗,亚克隆,阳性)] 我在做单抗，我有一个问题一直弄不明白，有限稀释时是不是要选单个细胞的阳性孔做亚克隆呢？这样的孔不好选啊。大家是怎样做的呢？ 关键词:[有限稀释 单抗 阳性 亚克隆]…
我在做单抗，我有一个问题一直弄不明白，有限稀释时是不是要选单个细胞的阳性孔做亚克隆呢？这样的孔不好选啊。大家是怎样做的呢？
回复是要选单个细胞的阳性孔做亚克隆的，有限稀释法的程序　　①　制备饲养细胞悬液(同融合前准备)　　②　阳性孔细胞的计数，并调细胞数在1～5×10３／ml　　③　取130个细胞放入6.5ml含饲养细胞完全培养液，即20个细胞／ml，100μl／孔加A、B、C三排为每孔2个细胞。余下2.9ml细胞悬液补加2.9ml含饲养细胞的完全培养液,细胞数为10个／ml，100μl／孔加D、E、F三排，为每孔1个细胞。余下2.2ml细胞悬液补加2.2ml含饲养细胞的完全培养液，细胞数5个／ml，100μl／孔，加G、H两排，为每孔0.5个细胞。　　④　培养4～5天后，在上可见到小的细胞克隆，补加完全培养液200μl／孔。　　⑤　第8～9天时，肉眼可见细胞克隆，及时进行检测。　　注:初次克隆化的杂交瘤细胞需要在完全培养液中加HT。回复是必须要选有单个细胞的阳性孔做亚克隆，我还没有做到这一步，我觉得应该是这样做：1.前一天做饲养层细胞，100μl／孔，注意一定不要扎破腹膜、肠子。2.把鉴定为阳性的细胞孔，计数，调整浓度为1个细胞／100μl，然后每孔滴加100μl，这样大多数孔里只有一个细胞，把只有一个细胞的孔标记，每培养3，4天后补液，第10天左右再次进行elisa检测。回复小妹做过亚克隆筛选但不同于楼上2为师兄。1.铺滋养层细胞1只鼠的腹腔巨噬细胞种4块96孔板2.24小时后做阳性孔的亚克隆3.按1块96孔板100个细胞计算，每孔100μl（最好用排枪加可以提高单克隆率）4.培养至5天时标记单克隆孔，期间不换液，第7天筛选每孔取液100μl后补新鲜培养基100μl回复这两天跟以前做单抗的商量，他们说尽量调成40~50个细胞/ml，这样单克隆的几率就会更大。
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