琼脂扩散试验 - 医学术语
利用可溶性抗原与抗体在内进行扩散，若抗原与抗体对应，并且比例适当，就会出现白色，此为。琼脂扩散试验可在试管内、平皿中以及玻片上的琼脂中进行。又可分为和两类。
琼脂扩散试验 - 单向琼脂扩散试验
单向琼脂扩散试验&&是一种常用的定量检测抗原的方法。将适量抗体与琼脂混匀，浇注成板，凝固后，在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。一定时间后，在两者比例适当处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准，则从曲线中可求出标本中抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种和中各种补体成分的含量，敏感性很高。
琼脂扩散试验 - 双向琼脂扩散试验
双向琼脂扩散试验&&是将倾注于平皿内或玻片上，待其凝固后，在琼脂板上打孔，将抗原、抗体分别注入小孔内，使两者相互扩散。如果抗原、抗体相互对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原、抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。双向琼脂扩散法可用来分析溶液中的多种抗原。一对抗原、抗体系统只能形成一条沉淀线，不同的抗原抗体系统在琼脂中扩散的速度不同，可在琼脂中形成不同的沉淀线。本法主要是用于检测血清中各种、、表面抗原等。缺点是需要时间过长，灵敏度不高。
万方数据期刊论文
- 中国预防兽医学报 -
万方数据期刊论文
- 山地农业生物学报 -
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保存二维码可印刷到宣传品抗原抗体反应
&抗原抗体反应
抗原抗体反应是指抗原与其相应抗体在体内、外的特异性结合。抗原抗体结合在体内主要表现为体液免疫应答的效应阶段，体现在免疫防御和病理损伤两方面。免疫防御作用包括抗体的调理吞噬细胞吞噬作用ADCC作用，促进补体的溶菌作用，中和细茵外毒素作用等等。免疫病理损伤作用则表现为超敏反应导致的机体损伤和功能紊乱。
根据抗原抗体反应具有特异性的原理，我们可通过抗原抗体体外发生的特异性结合反应后出现凝集(agglutination) 、沉淀(precipitation)等现象验来检测相应的抗体或抗原，这即是传统的免疫学检测技术。抗原抗体的检测通常的原则是用已知抗原检测未知抗体，或用已知抗体检测未知抗原。根据抗原抗体是否发生结合来判断在样本中是否存在相应的抗原或抗体。由于对体外检测抗原抗体反应中的抗原或抗体多来源于血清，故又称血清学检测。它广泛应用于于研究机体的免疫应答，抗原与抗体的特性以及疾病的辅助诊断、治疗评估等多种领域本章从实验免疫技术角度，阐述体外抗原抗体反应的基本规律。
黑色背景下可见白色沉淀峰。
定量检测可通过标准抗原制定标准曲线来测定，方法有两种。
黑色背景下，在琼脂槽的两边出现相对称的弧形沉淀线。
【注意事项】
轻轻摇动载玻片，置黑色背景上观察有无凝集颗粒出现，如在几分钟内载玻片的右端出现白色颗粒物质，则为凝集反应阳性。左端为抗原对照，无凝集现象出现。
& ABO血型鉴定试验
人类ABO血型的类型取决于红细胞表面的A、B抗原，如果只有A抗原，则为A型；只有B抗原，则为B型；同时有B抗原和A抗原，则为AB型；A、B抗原均无，则为O型。
根据待测人的红细胞与相应的抗A、抗B分型试剂在生理盐水中混合后是否出现凝集的现象可判断受试者的血型。
若待测的红细胞与抗A分型试剂发生凝集则表明该红细胞上有A抗原；若待测的红细胞与抗B分型试剂发生凝集则表明该红细胞上有B抗原。
【器材与试剂】
1.抗体:抗A诊断血清、抗B诊断血清
2.抗原:待测红细胞悬液
3.生理盐水、小试管、无菌金属笔尖、75％酒精、棉球、双凹玻片、毛细滴管等
1．采血& 采血时一般取耳垂或手指血。以采手指血为例，用75％的酒精棉球消毒手指尖，用无菌采血针迅速的刺破皮肤，用一次性定量采血管吸取血液约50μl。
2．制备红细胞悬液 &将所取血液加入装有1ml无菌生理盐水的小试管中，混匀，配制成浓度约为5％左右的红细胞悬液。
3．加样& 取干净的双凹玻片一块，在两端分别标记A、B，在凹孔内分别滴加抗A分型试剂、抗B分型试剂各一滴。然后于每凹孔中加入5％红细胞悬液一滴，将悬液混匀（注意勿使两种试剂相互混合），静置室温下，15分钟后观察结果。
观察结果时应将玻片置于白色背景下。如果混合液由红色混浊状变为透明，并出现大小不等的红色凝集块者则为红细胞凝集；如果混合液仍呈均匀混浊状说明红细胞未发生凝集。15分钟后观察的结果显示两侧都无凝集出现者，应再混匀一次，于室温下静置30分钟后再次观察，此时的结果为最终结果。
若肉眼观察时判断结果有困难，可在低倍显微镜下观察。未发生凝集时可见分散的单个红细胞；而红细胞发生凝集时可见数个红细胞凝集在一起。
【结果判断】
结果判断如表所示，其中正号表示出现凝集；负号表示未出现凝集。若待测红细胞与抗A分型试剂混匀后出现凝集,而与抗B分型试剂匀后不出现凝集则表明待测标本是A型血;相反, 若待测红细胞与抗A分型试剂混匀后不出现凝集,而与抗B分型试剂匀后出现凝集则表明待测标本是B型血; 若待测红细胞与两种分型试剂混匀后都出现凝集,则表明待测标本是AB型血; 若待测红细胞与两种分型试剂混匀后都不出现凝集,则表明待测标本是O型血。
【注意事项】
1.双凹玻片要清洁，务必注明A、B字样。
2.所用抗A、抗B分型试剂必须在有效期内使用。
3.抗A、抗B分型试剂不能混合。
4.待检红细胞悬液不宜过稀或过浓。
（二）直接试管凝集试验
将待测的血清在试管中进行一系列稀释后，直接与一定量抗原悬液混合，孵育一段时间后观察是否出现凝集现象。常用于检测待测血清中的抗体及含量，是检测未知抗体的一种半定量试验方法。
& 细菌的试管凝集试验
【器材与试剂】
1.抗体：1：40的抗伤寒杆菌免疫血清
2.抗原：伤寒杆菌鞭毛（H）抗原，伤寒杆菌菌体（O）抗原
3.生理盐水、小试管、1ml吸管、560C水浴箱、离心机等。
【操作方法】
1．稀释抗体& 一般用对倍稀释法
1）取清洁小试管14支，分两排排列于试管架上，每排七支，依次标记“1～7”号。
2）用1ml吸管于每排的第“2～7”号管内各加生理盐水0.5ml。
3）用此吸管在每排的第“1”号管内加入1：40抗伤寒杆菌免疫血清0.5ml。
4）在第一排的“2”号管内也加入1：40抗伤寒杆菌免疫血清0.5ml，并在管内来回吹吸3次，使血清与生理盐水充分混匀，注意勿使液体溢出。
5) 从第一排的“2”号管吸出0.5ml加入第一排的“3”号管，再次混匀，依此类推，稀释至第一排的“6”号管，最后从 “6”号管吸出0.5ml液体弃去.
6) 用同样的方法在第二排的“2～6”号管中稀释抗伤寒杆菌免疫血清。此时,两排试管中血清的稀释度分别为1：40、1：80、1：160、1：320、1：640和1：1280。
7) 两排的第“7”号管不加免疫血清，作为抗原对照管。
1)用1ml吸管分别取0.5ml伤寒杆菌“H”抗原加入第一排的“7～1”号管
2)换1支吸管在第二排“7～1”号管各加“O”抗原0.5ml。
3)加入菌液后，各管血清又稀释了一倍，血清最终稀释度为1：80、1：160、1：320直到1：2560。
4)将各管振摇混匀后，置水浴箱内,在500C 水浴2～4小时，再放4℃冰箱内或室温过夜，次日观察结果。也可振摇后以转/分离心5分钟观察结果。
1.抗原对照管，液体混浊，可有少量细菌沉积于管底，呈园点状，边缘清晰整齐。轻轻振荡，细菌即分散，此现象说明未发生凝集。
2.&O、H&凝集特点:&0&凝集为颗粒状凝块，振摇后分散成颗粒状;&H&凝集则为絮状凝块，振摇后呈絮状沉淀物。
3.根据凝集程度分级记录：
＋＋＋＋:上液澄清，全部细菌均凝集沉于管底。
＋＋＋：上液稍浊，绝大多数细菌凝集沉于管底。
＋＋: 上液较浊，约半数细菌凝集沉于管底。
＋：&& 上液混浊，少数细菌凝集沉于管底。
一：同抗原对照管，阴性反应。
4.血清效价(滴度)：能与十定量抗原发生“＋＋”凝集反应的血清最高稀释度，为血清的效价(凝集价)。
5.报告方式:如实报告“O”和“H”血清效价。血清效价;如血清最低稀释度无凝集或仅呈“+”现象者，报告阴性；如血清最高稀释度呈“+++”或”+++”以上凝集者，报告应高于1：2560，如果血清最高稀释度呈现“＋＋”凝集者，则应报告高于或等于1:2560。
二间接凝集反应
间接凝集反应是用人工方法将可溶性抗原（或抗体）吸附或偶联在与免疫无关颗粒性载体的表面（如正常人O型红细胞、绵羊红细胞、细菌、活性炭颗粒、胶乳微粒等），，形成颗粒性抗原（或抗体），再与相应的抗体（或抗原）进行特异性结合反应，在适当的电解质存在的条件下，并出现特异性凝集的现象。
根据反应方式不同，间接凝集又分为:正向间接凝集反应、反向间接凝集反应和间接凝集抑制反应。
根据载体性质不同，间接凝集反应可分为血凝反应（hemagglutination），胶乳凝集反应（latex agglutination）及协同凝集反应（coagglutination）。
（一）正向间接凝集反应（indirect agglutination）
将已知可溶性抗原吸附于微球上形成免疫微球(或致敏微球)，再与待测标本中相应的抗体相互作用，在电解质存在下，出现的凝集现象，则称为正向间接凝集试验。可用来检测血清中的自身抗体如类风湿因子、抗核抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等；以及针对某些病原微生物的抗体，如抗钩端螺旋体抗体和某些抗病毒抗体。
& 类风湿因子免疫胶乳试验
类风湿因子是一种抗“自身变性IgG”的抗体，也叫抗球蛋白抗体，他具有与人变性IgG结合的能力。利用人IgG致敏的胶乳与病人的血清反应，若标本中含有类风湿因子，则其与IgG致敏的胶乳作用，出现凝集。相反，若标本中没有类风湿因子，则不会出现凝集。
【操作方法】
1.用生理盐水稀释血清标本：取6支小试管，在第2~6支试管内分别加入生理盐水200μl，在第1支试管内加入生理盐水380μl。然后在第1支试管内加入待测血清20μl，混匀，吸取200μl，加入第2支试管，再次混匀，吸取200μl，加入第3支试管，依次稀释至第6管，混匀。则各试管内待测血清的稀释度依次为1：20、1：40、1：80、1：160、1：320和1： 640。
2.在玻璃板的小圆孔内分别加入不同稀释度的血清各一滴，阴性血清一滴，阳性血清一滴。
3.在各反应孔内分别滴加胶乳试剂1滴，注意在使用前应摇匀。
4.摇匀各孔中的液体。
【结果观察】
在1～3分钟内出现均匀凝集颗粒者为阳性，无凝集者为阴性，出现凝集现象的最高血清稀释度为类风湿因子的滴度。
阴性对照：无凝集。
阳性对照：出现均匀的白色凝集颗粒。
【注意事项】
1.胶乳试剂应置40C保存，但不得冰冻。2.胶乳试剂在每次使用前应充分摇匀。
（二）反向间接凝集反应（reverse indirect agglutination）
抗体先吸附于与免疫无关的微球上，形成为免疫微球(或致敏微球)，再与待测标本中相应的抗原作用，在电解质存在下，所出现的凝集现象称反向间接凝集试验。如检测患者血清中存在的乙型肝炎表面抗原和甲胎蛋白等。
& 反向间接凝集法检测甲胎蛋白
【器材与试剂】
1.抗体:抗甲胎蛋白(AFP)诊断血球。
2.抗原：AFP阴性血清、阴性血清、待测血清。
3.微量滴定板、小试管、1ml吸管、毛细滴管、，生理盐水、微型振荡器等。
1.抗原稀释:常用十倍稀释法稀释。
取3支清洁小试管分别标记“1、2、3”。于每管中加入0.9ml生理盐水，并准确吸取0.1ml待测血清加入，试管1中，混匀(连续吹吸3次)后，再吸0.1ml于试管2中混匀，同样吸0.1毫升于试管3中。这样，待测血清即被稀释成1:10、1:l00、1:1000。阳性血清、阴性血清亦作同样稀释。
2.加样:用毛细滴管从低浓度至高浓度分别取3个稀释度的待测血清、阳性血清、阴性血清各1滴(约25μl)加入微量滴定板的9个小孔中(注意标记)，然后每孔再加入抗甲胎蛋白(AFP)诊断血球1滴。另作1孔诊断血球对照（生理盐水＋诊断血球）。
3.将微量滴定板放在微型振荡器上振动1～2分钟，使之充分混匀。置室温或37C作用20～30分钟观察结果。
1.诊断血球对照孔:红细胞沉于孔底，呈小园点状，边缘清晰整齐。
2.以红细胞凝集程度分级记录。
＋＋＋＋：红细胞呈片层凝集，均匀铺满孔底，边缘皱折如花边状。
＋＋＋: 红细胞呈片层凝集，面积略小于“＋＋＋＋”。
＋＋: 红细胞呈片层凝集，面积较小，边缘松散。
＋: 红细胞沉于孔底，周围有少量散在凝集颗粒。
－: 同诊断血球对照孔，为阴性反应。
【正常值】
&2Ong/ml，本法检测为阴性。
【临床价值】
1.诊断原发性肝细胞肝癌专一性仅次于病理检查，约60～70％AFP高于正常值，假阳性率仅为2％。如果作AFP异质体分析，可以把原发性肝细肝癌诊断的特异性提高到98％以上。
2.为目前最好的早期诊断方法，可在症状出现前6～12个月作出诊断。
3.为反映病情和疗效的敏感指标。
4.有助于检出亚临床期复发与转移
（三） 间接凝集抑制反应（indirect agglutination inhibition）
诊断试剂为抗原致敏的载体及相应抗体，用以检测标本中是否存在与致敏载体相同的抗原。先将标本与相应抗体作用，然后再加入致敏的载体，出现凝集现象说明标本中不存在与致敏载体相同的抗原，相应抗体得以与载体上抗原结合，导致载体颗粒凝集。如果标本中存在抗原，则能与相应抗体结合，当再加入致敏载体时就不会出现凝集现象，即称作间接凝集抑制试验.同理，也可用抗体致敏的载体和相应的抗原作为诊断试剂，检测标本中的抗体，此时称作反向间接凝集抑制试验。
& 免疫妊娠诊断试验
【器材与试剂】
1.抗体：抗绒毛膜促性腺激素（HCG）诊断血清。
2.抗原：HCG胶乳抗原、HCG阳性尿液、阴性尿液、待测尿液。
3.双玻片、毛细滴管、生理盐水等
1.用毛细滴管取待测尿液1滴（约25ul）滴于双玻片孔内，再加上1滴抗HCG诊断血清，充分混匀。
2.取1滴HCG乳胶抗原滴加于上述孔内连续摇动2～3分钟观察结果。
3.以同样的方法作阳性对照、阴性对照、乳胶抗原对照（生理盐水＋乳胶抗原）。
将双玻片置黑色背景上观察有无白色凝集颗粒出现，如在几分钟内不出现凝集，则为间接凝集抑制反应阳性；反之，则为阴性。注意观察各对照孔是否符合结果：阳性对照孔无凝集；阴性对照孔有凝集；乳胶对照孔无凝集。
【注意事项】
1.试剂应保存在40C，且勿冻存，使用前应使试剂平衡至室温。
2.日光灯下不利于结果观察，观察时应排除非特异性凝集的可能性。
antiglobulin test7SIgG,
CoombsCoombsCoombs
CoombsCoombs
1.O5ml5~10
62~6100l12110100l2 100l366100l11012014018011601320沉淀试验 （一）单项选择题（A型题） 1.单向琼脂扩散试验，抗体与融化 ...沉淀试验
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杯碟法（琼脂扩散法）又称圆筒平板法（cylinder plate method）。用于测定抗生素效价的生物学定量方法之一。标准的方法是以20毫升的琼胶培养基放入陪替氏培养皿内做成平面，上面加上预先培养的试验标准菌种，例如掺入了葡萄球菌的琼胶形剂。
在干燥处保存。
琼脂的食用量
每餐约30克
琼脂的营养价值
琼脂能在肠道中吸收水分，使肠内容物膨胀，增加大便量，刺激肠壁，引起便意。所以经常便秘的人可以适当食用一些石花菜。琼脂富含矿物质和多种维生素，其中的褐藻酸物对动物灌胃、腹腔或静脉注射毒素来观察动物是否出现恶心、呕吐、腹泻、寒战等反应，或用免疫琼脂扩散法、间接血凝法和反向间接血凝法、免疫萤光法及放射免疫法等血清学检查均可检出食物中肠毒素的含量。
最后修订于 日 星期六 1杯碟法（琼脂扩散法）又称圆筒平板法（cylinder plate method）。用于测定抗生素效价的生物学定量方法之一。标准的方法是以20毫升的琼胶培养基放入陪替氏培养皿内做成平面，上面加上预先培养的试验标准菌种，例如掺入了葡萄球菌的琼胶入男性尿道2-4cm，用力擦取。
b．常用培养基。
2．血清学鉴定法：最常用的是琼脂扩散法。血清学诊断试验：酶联免疫吸附试验（ELISA）敏感性高：微量免疫荧光法（MIF）具有快速特点。 治疗治疗基本同衣原体治疗。强力霉素100mg口ein
甲种胎儿球蛋白试验；AFP
定性：双向对流琼脂扩散法 阴性 。
定量：反向被动血凝法 ＜25μg/L (＜25ng/ml) 放射免疫法 胎儿峰值(前3个月)2～4g/L (200～400mg/dl) 1岁 。
鸡新城疫和鸡传染性法氏囊炎二联高免卵黄抗体的制备
材料与试剂
1．新城疫灭活油佐剂苗
2．患传染性法氏囊炎的法氏囊组织
3．传染性法氏囊炎弱毒苗
4．健康产卵鸡群
5．新城疫血凝抗原
6．传染性法氏囊炎琼扩抗原
口腔医疗器械生物学评价 第2单元: 试验方法 细胞毒性试验：琼脂扩散法及滤膜扩散法
口腔医疗器械生物学评价 第2单元: 试验方法 鼠伤寒沙门氏杆菌回复突变试验（Ames试验）
别名α2-GP正常值琼脂双向扩散法：阴性。化验结果意义阳性：胃癌(78%～83%)。化验取材血液化验方法蛋白质测定化验类别一血液生化检查化验类别二蛋白质测定参考资料《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》最后修订于 2009年16℃水浴预温后与融化并冷至56℃的20.0g/L琼脂糖（24.0g/L琼脂）混匀。浇注6cm×8cm板，打孔，每孔加不稀释被检血清10μl 37℃湿室扩散48h。其余操作同免疫球蛋白单扩散法测定。
（2）标准曲线制备
将已知C1q含量液涂片法：对慢性腹泻患者以检查包囊为主，可作碘液染色，以显示包囊的胞核，同时进行鉴别诊断。用甲醛乙醚法沉淀包囊可以提高检出率40%～50%。另外，对于一些慢性患者，粪检应持续1周～3周，多次检查，以防漏诊。
(3)体外培养：培养法在诊断②15.0g/L琼脂：称取优质琼脂粉15g，加入蒸馏水500ml水浴煮沸，使琼脂溶解。然后再加入预先温热的0.1mol/L pH8.6巴比妥缓冲生理盐水500ml，混匀后分装小瓶，4℃冰箱保存备用。
（2）火箭免疫电泳法
①pH8.6查 & 细胞免疫测定
B因子的测定原理
将含有抗补体抗体的琼脂铺在玻璃板上，然后打孔，加抗原（补体）。在合适的温度、湿度环境中，经过一定时间扩散，抗原与混匀在琼脂中的抗体在比例合适处可形成清晰的沉淀环。沉淀环直径大小与抗原的浓度在1抗体阳性者肌腱和肾脏的病变常较重。
免疫印迹的优点是一次可同时检测7种多肽抗体，但其与对流免疫电泳法或琼脂双向扩散法比较阳性率并无显著提高，（主要原因是靶抗原经过热变性，使原先存在于分子表面抗原表位发生了改变）。因此相应多肽抗1抗体阳性者肌腱和肾脏的病变常较重。
免疫印迹的优点是一次可同时检测7种多肽抗体，但其与对流免疫电泳法或琼脂双向扩散法比较阳性率并无显著提高，（主要原因是靶抗原经过热变性，使原先存在于分子表面抗原表位发生了改变）。因此相应多肽抗生理盐水等量混合，调pH8.6，按1/2000加入NaN3防腐。
（2）15.0g/L琼脂：称取优质琼脂粉15g，加入蒸馏水500ml水浴煮沸，使琼脂溶解。然后再加入预先温热的0.1mol/L pH8.6巴比妥缓冲生理盐水500ml，混匀的经典方法为琼脂双向免疫扩散法（参看本章抗核抗体）。间接免疫荧光法一般用人肝组织切片为抗原片，可见细胞核中出现细颗粒状或网状荧光。也有人报道用免疫印迹法和用重组的p70、p80建立的ELISA法，但均未推广。
同免疫扩散法。
操的经典方法为琼脂双向免疫扩散法（参看本章抗核抗体）。间接免疫荧光法一般用人肝组织切片为抗原片，可见细胞核中出现细颗粒状或网状荧光。也有人报道用免疫印迹法和用重组的p70、p80建立的ELISA法，但均未推广。
同免疫扩散法。
操诺现象相关，但阳性患者多不发生肾炎。
免疫印迹的优点是一次可同时检测7种多肽抗体，但其与对流免疫电泳法或琼脂双向扩散法比较阳性率并无显著提高，（主要原因是靶抗原经过热变性，使原先存在于分子表面抗原表位发生了改变）。因此相应多肽抗诺现象相关，但阳性患者多不发生肾炎。
免疫印迹的优点是一次可同时检测7种多肽抗体，但其与对流免疫电泳法或琼脂双向扩散法比较阳性率并无显著提高，（主要原因是靶抗原经过热变性，使原先存在于分子表面抗原表位发生了改变）。因此相应多肽抗）18.36ml，最后以蒸馏水补足至1421.8ml。
（2）9g/L NaCl溶液。
（3）24.0g/L琼脂：优质琼脂粉2.4g，叠氮钠0.1g，加0.05mol/L pH8.2巴比妥钠-HCl缓冲液100ml，加热融化后，根据浇）18.36ml，最后以蒸馏水补足至1421.8ml。
（2）9g/L NaCl溶液。
（3）24.0g/L琼脂：优质琼脂粉2.4g，叠氮钠0.1g，加0.05mol/L pH8.2巴比妥钠-HCl缓冲液100ml，加热融化后，根据浇的测定原理
单向免疫扩散法：在含抗Ig血清的琼脂板小孔中加入样品，样品中的相应Ig向孔四周充分扩散，与琼脂板中的抗体形成肉眼可见的沉淀环。沉淀环的直径或面积与孔中相应的Ig含量成正比。根据不同浓度Ig参考血清用同法测定所得结果绘制的标准ot-Leyden）晶体。慢性患者的成形粪便中一般只能检得包囊，可采用硫酸锌离心浮聚法或汞碘醛离心沉淀法或硅石胶态悬浮液（商品名percoll）梯度分离法浓集后，再作碘染色检查包囊，可提高其阳性检出率。粪便标本分离培养原虫，常用Robinot-Leyden）晶体。慢性患者的成形粪便中一般只能检得包囊，可采用硫酸锌离心浮聚法或汞碘醛离心沉淀法或硅石胶态悬浮液（商品名percoll）梯度分离法浓集后，再作碘染色检查包囊，可提高其阳性检出率。粪便标本分离培养原虫，常用Robin倍数符合瓶签所标单扩散效价，混匀后，分别倒入模板内（要迅速，防止琼脂凝固）。冷却后，取去上层玻璃及模板，即得平整均匀的抗体琼脂板。
②打孔：取打孔器在抗体琼脂板上相距15mm（孔中心至孔中心）打孔，用针头挑去孔内的琼脂，孔边要求圆而规整抗体的测定原理
检测抗Scl-70的经典方法是琼脂双向免疫扩散法（Ouchterlony法），近年来则多用免疫印迹法（western blot法），两法原理可参看本章抗Sm抗体测定。用免疫荧光法检测时，在Hep-2细胞上呈现核的密集的斑点抗体的测定原理
检测抗Scl-70的经典方法是琼脂双向免疫扩散法（Ouchterlony法），近年来则多用免疫印迹法（western blot法），两法原理可参看本章抗Sm抗体测定。用免疫荧光法检测时，在Hep-2细胞上呈现核的密集的斑点法很多，有琼脂免疫扩散法、对流电泳法、反向被动血凝法（RPHA）、酶联免疫法、固相放射免疫法等。但前二者灵敏度不够，已很少用。RPHA法操作简单快速，不需特殊仪器，灵敏度高于前二者，为目前应用较多之方法，但其灵敏度与特异性仍不如酶联免疫法法很多，有琼脂免疫扩散法、对流电泳法、反向被动血凝法（RPHA）、酶联免疫法、固相放射免疫法等。但前二者灵敏度不够，已很少用。RPHA法操作简单快速，不需特殊仪器，灵敏度高于前二者，为目前应用较多之方法，但其灵敏度与特异性仍不如酶联免疫法冲液的电泳槽内进行电泳，将有孔的一端连接阴极，端电压3～4V/cm，电泳4～5h后，关闭电源，取下琼脂板测量。
同单向免疫扩散法。
化验结果临床意义
C4含量升高见于风湿热的急性期、多发性骨髓瘤（比正常值大8倍）、结节性动滋肝阴之品。此外，使用频度低于200例的药物竟有70味之多，半数以上仅由1篇文献所报道，说明药物较为分散。这反映本病的复杂性和探索本病治法的工作较为活跃。
①针刺加穴住注射
取穴：百会、胃区（头针穴）、内
①核酸探针检测法：近年应用的Gen-Probe PACE2系统和改良的PACE2法。
②核酸扩增检测法：又分为两种方法。
A.聚合酶链反应（PCR）：以CT主要外膜蛋白（OMP-1）作为引物，确定真阳性结果。该法快速、简便，对检测
①核酸探针检测法：近年应用的Gen-Probe PACE2系统和改良的PACE2法。
②核酸扩增检测法：又分为两种方法。
A.聚合酶链反应（PCR）：以CT主要外膜蛋白（OMP-1）作为引物，确定真阳性结果。该法快速、简便，对检测
①核酸探针检测法：近年应用的Gen-Probe PACE2系统和改良的PACE2法。
②核酸扩增检测法：又分为两种方法。
A.聚合酶链反应（PCR）：以CT主要外膜蛋白（OMP-1）作为引物，确定真阳性结果。该法快速、简便，对检测原理
检测抗Sm抗体过去常规采用琼脂双向免疫扩散（ouchterlony）法。自小牛胸腺提取的ENA与待测血清和标准参照血清（已知含抗Sm）分置于琼脂凝胶板上呈三角形排列的3个孔中，各种成分在凝胶中扩散，当以最适比例相遇时，抗原与抗体形原理
检测抗Sm抗体过去常规采用琼脂双向免疫扩散（ouchterlony）法。自小牛胸腺提取的ENA与待测血清和标准参照血清（已知含抗Sm）分置于琼脂凝胶板上呈三角形排列的3个孔中，各种成分在凝胶中扩散，当以最适比例相遇时，抗原与抗体形原理
检测抗Sm抗体过去常规采用琼脂双向免疫扩散（ouchterlony）法。自小牛胸腺提取的ENA与待测血清和标准参照血清（已知含抗Sm）分置于琼脂凝胶板上呈三角形排列的3个孔中，各种成分在凝胶中扩散，当以最适比例相遇时，抗原与抗体形倍数符合瓶签所标单扩散效价，混匀后，分别倒入模板内（要迅速，防止琼脂凝固）。冷却后，取去上层玻璃及模板，即得平整均匀的抗体琼脂板。
②打孔：取打孔器在抗体琼脂板上相距15mm（孔中心至孔中心）打孔，用针头挑去孔内的琼脂，孔边要求圆而规整倍数符合瓶签所标单扩散效价，混匀后，分别倒入模板内（要迅速，防止琼脂凝固）。冷却后，取去上层玻璃及模板，即得平整均匀的抗体琼脂板。
②打孔：取打孔器在抗体琼脂板上相距15mm（孔中心至孔中心）打孔，用针头挑去孔内的琼脂，孔边要求圆而规整NA抗体的有无。该法主要用于检测抗Sm和抗U1-RNP抗体，其优点是较琼脂糖扩散法敏感、快速，可于2h观察结果。
（2）免疫印迹法：将ENA抗原进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），使所含多肽抗原分离；再用电转印法将抗原转印于硝酸纤NA抗体的有无。该法主要用于检测抗Sm和抗U1-RNP抗体，其优点是较琼脂糖扩散法敏感、快速，可于2h观察结果。
（2）免疫印迹法：将ENA抗原进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），使所含多肽抗原分离；再用电转印法将抗原转印于硝酸纤。
双向扩散试验
在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可作出对抗原或抗体的定性分析。双向扩散也可分为试管法和平板法两种方法。
（一）试管法
试管法由Oakl检查 & 蛋白质测定
3.8sα2-糖蛋白的测定原理
同免疫扩散法测定。
同免疫扩散法测定。
同免疫扩散法测定。
免疫扩散法：
血清 50～150mg/L，中位数为90mg/L
血小板231定
间α胰蛋酶抑制物的测定原理
同免疫扩散法原理。
用新鲜血清或4℃冰箱放置72h以内，－20℃可保存6个月；－70℃可长期保存。
同免疫扩散法。
免疫扩散法：
200～700mg/L，均值，提倡使用药敏试验，坚持合理用药十分重要。
药敏试验分类
纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度，提倡使用药敏试验，坚持合理用药十分重要。
药敏试验分类
纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度，提倡使用药敏试验，坚持合理用药十分重要。
药敏试验分类
纸片扩散法
该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度生的酸。
其他病变材料如活检标本、胸骨穿刺物等可种于血琼脂或沙堡琼脂上，再以胶布封起，置于塑料袋内，以防培养基干涸。培养6～12周，当有菌丝时即应作鉴定。在血琼脂上菌落最初呈球状、脑形，粉红至红棕色，有时可转为白至淡棕色丝状菌落虾脑剥出放入小碗内，注意黑色的不要，是苦的，只要干净的虾脑；
2. 琼脂用水浸泡待用；
3. 虾脑隔水蒸15分钟；
4. 将琼脂放入虾脑中搅拌均匀；
5. 琼脂融化后搅拌均匀，晾凉即可。
最后修订于 日 星期一
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