有时候也遇到这样的问题说点個人看法：

1。首先考虑涂量的问题了有时候大家可能有这样的经验，涂900ul就满板都是像挺粘的东西涂不开似的，第二天就可能长不出菌叻我一般是一个100ul，一个900ul正常来说应该是没有什么问题的了。当然如果是比较严谨的人，可以估算一下最后能长几个菌比如说起始連接量是多少，连接效率大概有多少感受态细胞效率有多少，这样是大概能估计出长菌量的然后就照着长100--1000个菌的量涂平板。

2和感受態有很大关系。也需要考虑感受态细胞的浓度和在操作过程中是否使细胞死亡了最好的方法就是用商品化的感受态了。

3和连接样品的關系是最大的，很可能同时几个转化其他的都挺好，就有一个是这样的而且，越是不好连接的样品出现的几率越大。所以载体和爿段的处理应更严谨些，连接酶和连接体系的确定也应更稳妥些有时候变换转化的方法也是可行的，热转不出换电转看看电转不好换熱转看看，因为感受细胞是不一样的而且电转之前会有精制的步骤。