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抗体制备与使用实验指南
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抗体制备与使用实验指南
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《抗体制备与使用实验指南》收集了抗体制备与使用中的基本实验方法及相关的最新科研进展，这些方法是开展抗体制备研究的必备知识，包括鼠源性单克隆抗体的制备、纯化、应用以及抗体的修饰等，同时也包括部分基因重组性单克隆抗体，涉及内容具体、全面，反映了国际上的最新发展方向。《抗体制备与使用实验指南》对从事生物学、免疫学、生物化学与分子生物学、医药卫生科学领域的科研技术人员，以及高等院校师生具有参考价值。
《抗体制备与使用实验指南》：“十一五”国家重点图书出版规划项目
作者：（美国）G.C.霍华德（Howard.G.C.） （美国）M.R.凯瑟（Kaser.M.R.） 译者：张权庚 张玉祥 丁卫 等
译者序前言第1章 抗体1.1 一种多功能分子――抗体1.2 相关伦理思考1.3 实验室安全1.4 手册编排参考文献第2章 抗原2.1 抗原的选择2.2 多肽抗原2.2.1 多肽抗原的免疫进度表2.3 蛋白质抗原2.3.1 原核蛋白2.3.2 真核蛋白2.4 全细胞免疫原2.4.1 全细胞免疫原的免疫方案2.5 基因免疫2.5.1 质粒DNA2.5.2 腺病毒参考文献第3章 佐剂3.1 引言3.2 佐剂的使用3.2.1 总体要求3.2.2 弗氏佐剂的使用3.2.3 TiterMax佐剂的使用方案3.2.4 Ribi佐剂系统（RAS）的应用3.2.5 Gerbu佐剂的应用3.2.6 Imject铝盐佐剂的使用参考文献第4章 多克隆抗体制备4.1 概要4.2 抗原提呈细胞4.2.1 B细胞的抗原识别4.2.2 T细胞的抗原识别4.2.3 B细胞受体和抗体产生4.2.4 免疫记忆4.2.5 抗体4.2.6 佐剂的作用4.2.7 抗原特点4.2.8 免疫途径4.2.9 免疫步骤4.2.10 物种选择4.3 结论参考文献第5章 单克隆抗体的制备5.1 引言5.2 材料5.2.1 免疫原5.2.2 免疫用的动物5.2.3 免疫策略5.3 免疫程序5.3.1 培养基和骨髓瘤细胞5.3.2 免疫B细胞的制备5.3.3 融合和铺板5.3.4 筛选5.3.5 亚克隆和低温冻存5.3.6 杂交瘤细胞的扩增5.4 结论参考文献第6章 单克隆抗体的定量生产6.1 引言：方法比较6.2 抗体制备方法概况6.2.1 产量6.2.2 费用和设备6.2.3 动物福利6.2.4 免疫活性分子污染6.2.5 微生物污染6.2.6 抗体糖基化6.3 腹水的制备6.3.1 方法概述6.3.2 免疫原同种异体反应性或异种抗原反应性的对策6.3.3 体内制备方案：BALB/c小鼠腹水6.3.4 体内单克隆抗体的制备：通过异种的杂交瘤细胞系制备腹水6.4 细胞培养制备单克隆抗体6.4.1 在研究实验室中体外制备单克隆抗体6.4.2 实验方案：在CELLineCL-1000培养瓶中制备单克隆抗体6.4.3 用重组和转基因系统制备抗体6.5 结论参考文献第7章 抗体的纯化和鉴定7.1 引言7.2 抗体纯化7.2.1 通过沉淀进行部分纯化7.2.2 蛋白质A和蛋白质G7.2.3 IgM和FAB抗体片段的纯化7.3 抗体的鉴定7.3.1 区带（醋酸纤维）电泳7.3.2 通过280nm吸光度测定抗体浓度7.3.3 SDS-PAGE7.3.4 免疫印迹7.3.5 等电聚焦7.3.6 酶免疫分析7.4 结语参考文献第8章 细菌中制备抗体8.1 引言8.2 所需材料8.3 方法8.3.1 噬粒设计8.3.2 文库构建8.3.3 抗原特异性抗体的筛选参考文献第9章 抗体的化学和蛋白水解修饰9.1 引言9.2 一般步骤9.2.1 抗体溶液的稳定性9.2.2 抗体的定量9.2.3 抗体的浓缩和缓冲液置换9.3 胺类的修饰9.3.1 总体考虑9.3.2 胺反应试剂的分类9.3.3 NHS-PEO4-BIOTIN的生物素化反应9.3.4 用荧光染料进行标记9.3.5 巯基的导入9.3.6 聚乙二醇化9.3.7 与螯合剂的偶合9.4 巯基和二硫键的修饰9.4.1 IgG的二硫键和巯基9.4.2 二硫化物的互换反应9.4.3 其他涉及巯基和二硫键的氧化-还原试剂9.4.4 用卤代烃和N-烷基马来酰亚胺进行硫醇的烷基化9.5 碳水化合物修饰9.5.1 范例流程10：用NaIO4氧化IgG的碳水化合物部分9.5.2 范例流程11：DAVLB酰肼与氧化型IgG的偶合9.6 抗体的固相化9.6.1 聚苯乙烯培养皿和ELISA孔的固相化9.6.2 与亲和介质的共价偶合9.6.3 经生物素介导与亲和介质的固相化9.7 蛋白的水解修饰9.7.1 木瓜蛋白酶水解兔IgG制备Fab片段9.8 抗体与其他蛋白质的交联9.8.1 范例流程18：肼与IgG氨基的交联9.8.2 范例流程19：醛与另一个蛋白质氨基的交联9.8.3 范例流程20：MEHN-IgG与FB-蛋白质的交联参考文献第10章 抗体的应用10.1 引言10.2 蛋白质转印10.2.1 转印设备10.2.2 转印缓冲液10.2.3 条件的优化10.2.4 转印膜10.3 检测10.3.1 蛋白质印迹的直接染色10.3.2 抗原的检测10.3.3 蛋白质免疫印迹的检测抗体10.3.4 免疫印迹实验中抗体的替代品10.3.5 蛋白质免疫印迹的定量10.3.6 相对分子质量标准品……第11章 免疫组织化学法第12章 免疫电子显微镜第13章 流式细胞术第14章 酶联免疫吸附试验第15章 抗体的未来：挑战与机遇索引彩图
抗体可称为在地球上生命的发展历史中最重要的一群蛋白。这些“魔弹”已经成为生物学和医学研究中不可或缺的工具。在近25年生物学领域所收获的重要知识的浪潮中，抗体起着关键性的作用，而在医学实践方面，各种各样疫苗的研究成功和使用已经使多种传染性疾病得到了控制（至少在发达国家是这样），例如脊髓灰质炎、腮腺炎、麻疹、水痘等，并且已基本使天花绝迹。我们希望本书对生物医学领域的研究人员和学生有所帮助。尽管未来在制备和使用抗体方面一定还会出现新的方法，但目前抗体的使用方法，如酶联免疫试验（ELISAs）、蛋白质印迹方法（Western Blot）、免疫组化、流式细胞术等，其功能是如此强大，以致于在未来相当长的时间内这些技术方法仍将对生物医学科学领域起着关键作用。我们想在此对本书的所有作者表达深切谢意，在他们杰出的专业知识，优秀的写作和对本书的热心支持下，本书的出版才成为可能。我们也想在此深切感谢CRC出版公司负责本书出版工作的编辑Judith Spiegel，感谢她对本书的诸多帮助和极大的耐心。
2.2多肽抗原多肽无疑是生产抗原的最快方式，可用于免疫接种来制备抗体。许多机构和公司发现保持核心多肽合成的能力经济有效。如果不具备多肽合成能力，一些商业公司提供多肽合成定制服务。这种方法可靠、经济，可在几周之内提供高质量的多肽，其数量足以用于免疫接种。对于典型的多肽免疫原，大约500美元可以买到10mg含15个氨基酸并且纯度>80％的多肽（circa 2005），这些多肽足够免疫几个动物来得到抗体，并用酶联免疫吸附试验进行抗体筛选。多肽可以特别有效地提高抗体对抗原某区域的特异性，如新的结构域或同源性最低的区域。当抗原没有其他来源的时候，也可使用多肽。许多情况下，重组蛋白因为不能被表达和纯化而不能作为抗原的来源。对于大分子跨膜蛋白，如G蛋白偶联受体（在制药领域重要的分子家族）来说这是经常发生的，对应胞外结构域蛋白环状结构的短肽已被证明是可行的免疫原，可以产生针对这些复杂分子的抗体。由6个氨基酸组成的肽可以用来制备抗血清，由10～12个氨基酸残基组成的多肽通常有更高的免疫原性[2]。一个较短的抗原表位的例子是Flag标签，其在蛋白质纯化、鉴定和功能分析领域被广泛使用。这是一个八肽序列（DYKDDDDK），其单克隆抗体和多克隆抗体很容易买到。我们发现由12～15个氨基酸组成的多肽在多数情况下都是非常好的免疫原。由30～35个氨基酸组成的较长多肽，虽然本身化学合成受限，但也是非常好的免疫原，其优点是可能会形成相关的二级结构。多肽免疫原使用受限是因为其线性表位序列短，在一个完整的蛋白质抗原中不易被识别。因而由多肽产生的抗体趋向于识别线性表位，总的来说，在免疫印迹实验和其他识别变性蛋白的抗体实验中效果非常好。然而，由多肽产生的抗体通常不能识别蛋白质构象，因此不太可能和天然分子反应。这样的抗体往往没有功能，不能用于流式细胞仪。但是应该指出的是，在有些情况下多肽免疫原确实能够生成能识别天然蛋白质的抗体。例如，当蛋白质抗原的线性表位没有被其三级结构所掩盖的时候。
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帮助平台入驻日期：乙肝疫苗为何能预防乙肝病毒感染?
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