论文:海南地区乙型肝炎基因型与YMDD自然突变的相关性-中大网校论文网本站已经通过实名认证，所有内容由朱刚剑大夫本人发表
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检测乙肝病毒YMDD 变异的意义
&&& 拉米夫定是近年用于抗HBV的主要药物之一，它与乙毒多聚酶结合后，竞争抑制多聚酶活性，使HBV-DNA的链合成终止，从而抑制病毒复制，进而达到控制炎症、稳定病情甚至阻止的进展。拉米夫定因其抑制HBV 效果明显、使用方便、患者对其耐受性好而在乙肝病人的抗病毒治疗中被广泛应用。
&&& 但是在长期应用过程中，HBV 可发生变异而对拉米夫定产生耐药性, 抗病毒疗效随之降低。部分患者使用拉米夫定治疗超过半年以上即发生耐药, 耐药一旦发生, 抗病毒疗效将降低为原来的万分之一。
&&&& 为什么会产生耐药了。原来乙型病毒和其它病毒一样，在复制过程中可产生多种变异，它的变异是在慢性感染过程中为适应生存环境而自然发生的，也可于发生在应用药物或接种疫苗后。国内外研究表明，拉米夫定治疗期间，病毒DNA编码的DNA聚合酶基因序列发生了变异，这种变异在YMDD序列及其附近，因而称为YMDD变异。YMDD变异既有在拉米夫定应用后出现的，也有病人未用过拉米夫定却出现了YMDD变异。当长期应用拉米夫定时，发生YMDD变异的比率逐年增加，据来自台湾的文献报道，应用拉米夫定1年时的平均YMDD变异率约为14％，2年、3年和4年分别为38％、49％和66％。
&&& 因为病毒变异的缘故，临床通常把病毒株分为野毒株和变异株，YMDD变异株对临床预后和病毒学反应具有重要意义。当病毒发生了YMDD变异后，拉米夫定失去了对病毒的抑制作用，病毒重新出现复制，会伴有HBVDNA水平反跳和肝功能变化，甚至导致病情恶化。故开展YMDD变异的检测很有必要，对及时调整治疗方案、合理用药及提高疗效具有重要意义。
&&& 拉米夫定耐药以后，究竟采用拉米夫定联合阿德福韦，还是1.0 mg的恩替卡韦，因为没有头对头的比较，就很难有一个客观的结论。
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肝病内科分类问答浅析乙肝病毒基因突变检测及治疗
作者：未知&&&&来源：&&&&&查看：次
字体： ：我国有乙肝病毒携带者约1.5亿、慢性迁延性肝炎约2500万、慢性活动性肝炎约1000万、重症肝炎约150万、肝硬化约100万和肝癌16～30万。肝硬化和肝癌80%以上是由乙肝病毒引起，而且80%左右来源于家族性垂直传播、与病人接触而感染机率很少。乙肝传染病已被国家疾病预防控制中心列为重点监控的疾病之一。 &&&&&&& 乙型肝炎病毒（HBV）属嗜肝病毒科，基因结构复杂，根据HBV-DNA核苷酸序列异质性R8% 为一种基因型的规定，HBV目前分为A～H 8个基因型，其中A、B、C、F 4个基因型存在不同的亚型，且分布呈区域性。由于其在复制过程中HBV-DNA聚合酶缺乏校正功能，导致易于变异，有报导HBV的基因型与基因型变异可能与HBV相关性肝癌的发生发展有关。HBV变异给疾病的预防、诊断、治疗和预后带来了新问题，不同基因型的基因变异、表现及对抗病毒、肝移植等的治疗反应存在差异。 &&&&&&& 二、变异及区域 &&&&&&& HBV受自然压力、个体免疫力和药物治疗作用出现变异。HBV有四个开放阅读框架（ORE）即S、C、P、X区。 &&&&&&& 1、C区变异：用基因芯片检测HBV前C区和C基因启动子（BCP）区4位点突变，发现前C区A1896、前C区A1814、BCP区nt1762、BCP区nt1764突变检出率分别是58.57%、12.86%、54.29%、52.86%。突变的发生依次是慢重肝、慢乙肝重度、中度、轻度，血清病毒标志是HBeAg(-)HBeAb(+)、HBV-DNA定量在104-106copy/ml之间的突变发生率最高。可以解释小三阳DNA阳性之原因：HBeAg前C区A1896位的G变异成A，密码子UGG变为终止UAG，使HBeAg不能合成，但不影响病毒复制。 &&&&&&& 2、S区变异：前S1有识别功能，前S2是介导受体进入功能。前S区的变异可能是病毒逃避宿主免疫的一种方法，前S区的变异决定不同的HBV亚型。124、131位变异或122-124间插入变异可改变S抗原决定簇的构型，致HBsAg假阴性。145、141、126、133位氨基酸的改变，用常规试剂仍可检出HBsAg，但可能削弱HBsAg的无免疫性，使高效价的乙肝免疫球蛋白或接种诱生的HBsAb难与变异株的HBsAg结合，缺乏中和特性，使HBsAg与HBsAb同时阳性。在HBV-DNA阳性时，无论是乙肝病毒基因变异株或野毒株，前S1抗原是判断乙型肝炎病毒复制的重要指标。 &&&&&&& 3、P区变异：用微孔板核酸杂交法检测乙肝病毒P基因区变异，突变位点主要位于HBV-DNA聚合的区域（YMDD），M1（蛋氨酸）可被VC（缬氨酸）或IC（异亮氨酸）替代。研究用拉米夫啶（LMV）治疗慢性乙肝而发生耐药的有关变异可见：LMV本身可引起HBV的变异即YMDD变异，用LMV四周后50-70%的病人出现YMDD变异。& &&&&&&& 4、X区变异：HBV-X蛋白对信号转导通路及细胞凋亡有影响，X蛋白对核转运影响和对线粒体直接作用。X区变异引起X蛋白（HBXAg）过度表达，激活体内癌基因和抑制抑癌基因，导致肝癌的发生。有报导：用聚合酶链反应检测原发性肝细胞癌（HCC）患者癌组织及癌周组织中HBV-X基因，检出率分别为68%和77%。&&&&&&& 三、检测 &&&&&&& 用乙型肝炎病毒基因多态性检测芯片检测乙型肝炎病毒基因的多态性，用酶免法（ELISA）检测乙型肝炎病毒Pre-S1Ag，用时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒血清标志物。用聚合酶链反应（PCR）检测HBV-DNA时的注意点： &&&&&&& 1、 大三阳HBV-DNA假阴性的PCR检测可改变引物序列再进行PCR扩增。 &&&&&&& 2、 患者用LMV后，HBV可下降至4*103拷贝/ml以下，如不降或反弹，提示基因突变（P区）。 &&&&&&& 3、 HBV-DNA定量检测随着病变组织的“恶化”，患者HBV-DNA有逐渐下降的趋势，提示预后较差。 &&&&&&& 四、治疗 &&&&&&& 1、泛昔洛韦（FAM）：其代谢为具抗病毒活性的三磷酸喷昔洛韦，使未成熟的HBV-DNA链合成中断。长期使用也可引起变异。 &&&&&&& 2、LMV： HBV的YMDD是药物的结合位点，但变异后LMV无效。 &&&&&&& 3、阿德福韦酯（ADV）：只要二磷酸形式就能抑制HBV-DNA的多聚酶，其对FAM和LMV耐药有效。有报导：用核酸序列分析未发现以前己证实的与ADV耐药均有关的A181V/T及rtN236T变异体。但有多个目前未报道的氨基酸替换位点，且服药前均有与LMV耐药性变异有关的rtL180M变异体存在。所以rtL180M替换可能影响ADV的抗病毒疗效，ADV耐药性变异很可能还存在于A181V/T及rtN236T以外的位点，或者是ADV耐药性变异株出现较晚。 &&&&&&& 4、干扰素和胸腺肽：前面三种是HBV的抑制剂而非病毒清除剂。使用后要通过机体的免疫功能来消除病毒。要注意当变异株与野生株混合感染时，消除野生型的同时使变异株成为优势毒株。故建议使用干扰素或小剂量乙肝免疫球蛋白（HBIG）和LMV或ADV联合用药治疗乙型肝炎，在用HBIG+LMV基础上如再发生YMDD等变异用HBIG+ADV。 &&&&&&& 二十世纪末，随着我国和医疗技术的高速发展，在各级部门的关心下，也为了人民的健康需求，卫生部规定把新生儿接种乙型肝炎病毒疫苗纳入计划免疫的范围。可以预见，我国的乙型肝炎病人总数会大大减少。 参 考 文 献 [1]小池郎.乙型肝炎病毒所致肝癌.日本医学介绍，1999，(5). [2]王耀宗.阿德福韦治疗慢性HBV感染的临床研究.国外医学.流行病学.传染病学分册，2001，(04). [3]江秀梅.乙型肝炎病毒基因结构、基因型及病毒变异。实用预防医学.2007，(05). [4]谢南，朱小诚.90例HBV基因型与拉米夫定疗效的研究（J）实用临床医学，2003，(04).
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FQ-PCR临床应用解读
Clinical ApplicationInterpretation of the Fluorescence Quantitative PCR荧光定量PCR临床应用许泼实解读1内容提要一、FQ-PCR技术简介 二
、乙型肝炎的病原检测三、丙型肝炎的病原检测四、性病相关病原体的检测五、其他分子生物学项目2荧光定量PCR技术3基因诊断与PCR细胞膜细胞核 DNA?基因诊断：通过核酸的分子 生物学检测直接检测基因的 存在状态或缺陷对疾病作出 诊断。 PCR是一种DNA的快速扩增 技术，它通过两个引物片段 和一种耐热酶，可在短时间 内把特定的DNA片段扩增 1000万倍。转录mRNA4 基因诊断?翻译蛋白质3 免疫学诊断 2 生化诊断1 形态学诊断?80年代发明PCR，90年代中 期PCR临床应用在国内全面 开展，98年荧光定量PCR技 术开始应用于临床检测。4荧光定量PCR技术?指在反应体系中加入荧光标记，利用荧光信号积累实时监测整 个PCR过程，通过标准曲线对PCR终产物的分析，实现对未知 起始模版进行定性和定量的一种技术。“荧光共振能量转移”5系列标准品所做出来的标准曲线达到阈值时的循环数浓度对数6荧光定量PCR技术的优点??特异性强：直接扩增病原体的特异DNA或异常基因片段灵敏度高：可检测到极少量的DNA，有效降低漏诊率 显著缩短病原体检出窗口期? ? ? ? ?高效省时：扩增周期短，有利于快速诊断 定量准确：利用标准曲线法，采用对数期分析 取材范围广：血清、痰液、体液、毛发等多种样本 全封闭反应：无需PCR后处理，降低污染 自动化程度高：操作安全，避免人为判断7缩短病原体检测 “窗口期”FQ-PCR检测 HBV HCV HIV? ? ?“窗口期” 核酸检测“窗口期” 45-56 72 22 10 12 11缩短天数 36-47 59 11有效减少窗口期漏检，避免“被医院感染” 检出免疫学方法尚无能为力的免疫静默感染、乙肝隐匿性感染、病毒变异株感染等 提高献血员窗口期筛查检出率，降低输血传播病毒风险，进一步保障用血安全?鉴定职业暴露源的传染性及被暴露者的监测周期8我国ELISA漏检远高于国外为什么？国家或地区 加拿大 法国 德国 日本 美国 中国 HBV 1::::000 1：4278 HCV 1:::::：40648 HIV 1:::::：81296荧光定量PCR技术的临床应用? ?病毒性肝炎（HBV、HBV-YMDD、HCV） 性病相关病原体（CT、NG、UU、HPV、HIV、TP）??优生优育相关项目：HCMV、HSV-Ⅱ、TOX、RV其它病原体检测：结核杆菌、肺炎支原体、EB病毒、伤寒杆菌、 幽门螺旋杆菌等10如何看FQ-PCR测定报告? ? ?定量--测定的是量的“多”或“少”；定性--则是测定某种 物质的“有”或“无”，用于未知病人的确认诊断。 定量测定报告：反映被检标本中病毒DNA/RNA存在的多少； “copies/ml”表示每毫升血清中病毒基因组的拷贝数，该 数据越大，表明病毒在人体内的复制越活跃。例如“HBV DNA=4.3×103 copies/ml” 代表每毫升血清中有4300个乙肝病毒 “10n”：n越大，表示含量越高。 “＜1.0×103 copies/ml”―有没有HBV感染？ ------结合其他指标判断11乙型肝炎病毒检测1213乙型肝炎病毒结构及特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体 HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，一般不存在于血循环中HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标 HBeAb：有一定的保护作用，预后良好14HBV感染细胞的过程HBV侵入肝细胞后，部分双链 环状HBV DNA在细胞核内以 负链DNA为模板延长正链以修 补正链中的裂隙区，形成共价 闭合环状DNA (cccDNA)；然后以cccDNA为模板，转录成几种不同长度的mRNA，分别 作为前基因组RNA和编码HBV 的各种抗原；cccDNA半寿 (衰) 期较长，很难从体内彻底清除，病毒DNA 可发生整合…… 15?重组乙肝疫苗(Hepatitis B vaccines, HepB)和HBIG联合应用可有效降低HBsAg阳性母亲所生婴儿及儿童的 HBV感染率，对HBV感染高危儿的保护作用可达90%以上。16乙型肝炎诊断?临床诊断 既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月，现HBsAg和（或）HBV-DNA 仍为阳性者，可诊断为慢性HBV感染。可分为：慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、携带者、隐匿性慢性乙型肝炎?实验室诊断 ? 生物化学检查：ALT、AST、血清白蛋白、PT、胆碱酯酶、AFP ? 血清学检查：乙肝蛋白标志物 ? HBV-DNA、基因型和变异检测：定量检测、分型和耐药突变检测? ?影像学诊断 病理学诊断17HBV DNA检测的临床意义?HBV存在最直接的依据，HBV复制和患者具有传染性的标志；调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也 不是所有“小三阳”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复 制状态，最准确的方法还是通过检测HBV DNA来决定。只要抽血化验检测乙 肝病毒DNA 呈阳性，无论其他乙肝病毒检测结果如何，都说明患者体内存在 复制状态的乙肝病毒，血液具有一定传染性。?弥补HBV变异造成的免疫学方法Ag / Ab的漏检 HBeAg(-)[/抗Hbe(+)]：前C区变异 HBsAg(-)：S区变异 低水平感染：单项抗HBc(+) 可检测出隐匿性慢性乙型肝炎?目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标。18HBV DNA结果应用的说明?HBV DNA 定量不能说明病情轻重，乙肝病毒DNA 定量数值只能 说明游离在血液中病毒的含量，病毒多少、含量高低与病情严重程度没有直接关系；? ?HBV DNA水平随时都在发生变化：两周左右复查 乙肝病毒本身不引起肝细胞病变，感染的肝细胞仍然是长寿的，半衰期6 ～12个月或更长；乙肝病情轻重决于很多因素，例如患者的免疫状态、遗传因素、病毒的变异等，病毒数量多少不是病 情演变的决定因素。19HBV蛋白标志物检测的影响因素?样本采集与处理的影响① 标本严溶血或混有红细胞易造成假阳性；② 塑料试管能吸附抗原物质造成假阴性；③ 抗凝剂影响：肝素抗凝血易造成假阳性，EDTA、NaN3可抑制HRP(辣根过氧化物酶)活性造成假阴性；④ 标本凝固不全，有纤维蛋白原残留，易造成假阳性。20HBV蛋白标志物检测的影响因素?试剂及方法的影响① 不同厂家试剂质量差异参差不齐：灵敏度、特异性、孔间吸光度差、标记酶的活性及显色液的稳定性等存在一定的差别；② 不同方法灵敏度不同，对变异及亚型的检出能力不同。21HBV蛋白标志物检测的影响因素?操作技术的影响① 加样器的洁净与否和吸量的准确性，直接影响检测结果；② 温浴影响：干浴与水浴，边缘效应；③ ELISA操作的重要环节：冼涤，立式洗板机； ④ 结果判读：必须使用酶标仪检测，每板保留一个空白、至少2个阴性对照，1个阳性对照。22HBV蛋白标志物检测的影响因素?HooK效应的影响：应用ELISA一步法时，一些标本中抗原含量 过高，产生HooK效应，影响检测结果，所以现在强制要求采用两步法，或使用线性范围宽的定量法，以减HooK反应的发生。?干扰物质的影响：有人统计发现大约40%的人血清标本中含有非 特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果；常见的干扰物质有：RF、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig 抗体、交叉反应物质、高浓度的AFP（如孕妇）等。23HBV蛋白标志物检测的影响因素?药物的影响：高效价的乙肝免疫球蛋白会与sAg形成复合物，影 响sAg的检出，所以sAg阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，sAg检测会呈阴性反应；乙肝大三阳的孕妇，为阻断乙肝母婴垂直传播时，在孕第8、9、 10月常规注射乙肝免疫球蛋白，不仅影响孕妇HBsAg的检出，而且乙肝免疫球蛋白属IgG抗体能通过胎盘进入胎儿体内与胎儿血液中的HBsAg结合形成复合物，影响新生儿HBsAg的检出， 导致“sAg-eAg+cAb+”（35阳性）等少见模式的出现。24HBV DNA检测不受上述因素影响25HBV-DNA检测原始数据分析强阳对照 临界阳对照 阴性对照 标准曲线相关系数应达到0.98以上 103 ～ 1011IU/ml ＞1011IU/ml ＜103IU/ml 结果有效 应适当稀释使其落入有效范围内 数据仅供参考 Ct&25 25&Ct≤35 Ct值无数据26YMDD变异检测?由于HBV-DNA聚合酶缺乏校正机制，在拉米夫定外在选择压力下，易 发生YMDD(YIDD和YVDD)变异，耐药一旦发生，抗病毒疗效即显著降 低，而某些核苷类似物（阿德福韦、恩替卡韦）等对YMDD变异株有抑 制作用，临床治疗有效，因此使用拉米夫定的HBV患者进行YMDD变异 检测十分重要，有助于监测肝炎病情、评价抗病毒疗效，及时调整治疗 方案。?YMDD：酪氨酸－蛋氨酸－天门冬氨酸－天门冬氨酸YMDD位于HBV多聚酶的关键功能区，如发生YMDD变异，则其中的蛋 氨酸(M)突变为异亮氨酸(isoleucine，I)或缬氨酸(valine，V)形成YIDD变异株或YVDD变异株 。27Ct≤38 检测样本Ct Ct &38阳性 复检 Ct&40 者为阳性YVDD YIDD YVDD YVDD阳 阳 阳 阴YIDD YVDD YIDD YIDD阴 阴 阳 阴HBV YVDD突变 HBV YIDD突变 HBV YVDD/YIDD突变 HBV野生型若定量结果为阴性，则判定该样本为 HBV 阴性。为什么HBsAg阴性不能排除HBV感染？? ? ? ?窗口期 蛋白检测试剂不够灵敏：需检测HBV-DNA 隐匿性慢性乙肝（S基因变异） 重叠HCV感染（干扰HBsAg合成）29HBsAg血清学转换不要轻易判断为治愈错误认识：HBsAg转换为抗-HBs意味着HBV清除或乙肝治愈 抗HBs阳性就万无一失了吗！？No. 血清HBsAg转阴并非代表HBV清除或乙肝治愈；单一抗HBs阳性HBV DNA检出率0-11.8%；单项抗-HBs阳性者 经肝穿刺活检，89.2%为慢性乙肝(58/65)，仍存在HBV-DNA复制，并有导制肝纤维化或肝硬化可能。30丙型肝炎病毒检测31丙肝病毒? ?单股正链RNA病毒(9.6kb) RNA 聚合酶缺乏校正功能 易变异?? ?6个基因型和不同亚型：如1a 2b 3c1a呈全球分布 占70% 我国以Ⅱ型为主，在中国的平均感染率为3.2% 每30人中有一人感染丙肝病毒HCV电镜照片 32中国慢性丙型肝炎的分布黑龙江 吉林 新疆 甘肃 北京 河北 青海 西藏 四川 陕西 河南 湖北 湖南 江西 福建 台湾 上海 浙江 天津 辽宁&3%（ 14 省） 2～3%（ 11 省） &2%（ 6 省）贵州 云南 广西海南33丙肝传播途径及变化血液传播方式输血和血制品 吸毒者混用注射器 经破损皮肤和黏膜暴露 目前最主要传播方式性传播方式不洁性行为母婴传播方式抗-HCV阳性母亲将 HCV传播给新生儿的 危险性为2%伴有其它性传播疾病者 特别是HIV者若母亲在分娩时HCV RNA阳性，则传播的 危险性高至4%～7%传统传播方式（输血、吸毒）：60%新型传播方式：30-40%文身、文眉、美容、美甲、在非正规医院拔牙、洗牙、修脚、不洁性行为、静脉药瘾等34HCV：比乙肝难防、难治！?首先从症状上说，乙肝容易活动，表现出的症状比较多，如黄疸 、转氨酶升高等，相对更容易被发现；而丙肝症状很不明显，最 常见的表现是疲劳，容易与工作引起的疲劳混淆；?其次虽然两者途径一样，但传播后结果不同：成人感染丙肝病毒 后有60～80%会发展为慢性丙肝，而成人感染乙肝病毒后只有5～10%的人发展为慢性乙肝；?再次从预防上，乙肝可以通过接种疫苗进行预防，而丙肝目前还 没有预防性疫苗；最后也是最重要的一个区别就是，丙型肝炎通过积极的规范治疗是有很大可能被治愈的。35丙肝自然史乙肝病人肝硬化后肝癌的概率10%，而丙肝则是30% 合并HBV感染、嗜酒(≥50g/d)、NAFLD等，促进疾病发展20-30年后未清除者约有60～80％出现慢性化6个月90％患者抗HCV阳性 仍有10%无抗体产生3个月后外周血检出HCV RNA 出现临床症状时，仅有50％ ～70％患者抗-HCV阳性1～3周肝硬化和HCC是慢性丙型肝炎患者的主要死因； 乙肝病人中导致肝硬化后再转变为肝癌的概率是10%，而丙肝则是30%。36HCV蛋白标志物的应用缺陷?HCV抗原很难检测，抗HCV-IgM在病毒感染后即可检测到，一般持续 1～3个月，抗HCV-IgG可长期甚至终生携带；?慢性丙型肝炎长期抗HCV阳性，只表示曾经感染了丙肝病毒并出现了 相应的免疫应答，并不代表体内仍有丙肝病毒的存在或复制；? ?抗-HCV抗体检测只能作为高危人群、HCV感染者初筛，不作诊断依据；HCV抗体不是保护性抗体。37HCV-RNA检测的临床应用?HCV-RNA是病毒感染和复制的直接标志，定量测定有助于了解病毒复 制程度、抗病毒治疗的选择及疗效评估等；?临床诊断：在免疫学检测的“窗口期”或一部分不产生抗体的丙肝 病毒携带者，都可出现HCV-RNA阳性、抗HCV阴性的检测结果；医疗纠纷中的“举证倒置”，患者入院前后进行HCV-RNA的检测；?弥补ELISA方法的高漏检率，HCV-RNA可作为HCV感染诊断的灵敏指标， HCV主要通过输血和血制品传播，对献血员及血制品进行HCV-RNA检测，可以有效减少医源性丙型肝炎的发生和传播。 核酸检测在HCV感染的诊断中要比HBV感染的诊断重要得多！38HCV-RNA结果应用说明?HCV病毒载量的高低可以作为抗病毒治疗的应答与疗效评估的观察指 标，但与疾病的严重程度和疾病的进展并无绝对相关性；?抗病毒治疗指证：只有确证为血清HCV RNA阳性的丙型肝炎患者才需 要抗病毒治疗；?患者感染丙肝病毒后，病毒对肝细胞的破坏就在持续，直至出现肝硬化或恶变成肝癌。丙肝不存在病毒健康携带者，只有早发现、早 治疗，才能减轻病毒对肝细胞的破坏。丙肝如能早发现、早进行抗病毒治疗，70%以上的患者可以彻底治愈。39性病相关病原体的检测40性病在我国发病率在传染性疾病中位居第3位。41常见性传播疾病病原体? ? ? ? ? ? ?淋病双球菌(NG) 沙眼衣原体(CT) 解脲支原体(UU) 梅毒螺旋体(TP) 乳头瘤病毒(HPV) 单纯疱疹病毒(HSV) 人类免疫缺陷病毒(HIV)42淋病双球菌与致病性?? ?淋病：主要通过性交传染病原体：淋病奈瑟菌(淋球菌) G(-) 需氧菌 男性急性淋病：潜伏期2～5天，尿道口红肿、发痒、轻微刺痛，有稀薄黏液或浓液流出，治疗不彻底易隐伏于尿道体形成慢性；主要合并症有前列腺炎、精囊炎、附睾炎；?女性急性淋病：潜伏期不定，有尿频、尿急、尿痛，阴道分泌物异常或增多，外阴刺痒，阴道有脓性分泌物；主要合并症有盆腔炎、继发性输卵管卵巢脓肿，可致不育。43沙眼衣原体与致病性?有15个血清型，不同的血清型能引起不同的疾病，其中A、B、 Ba及C型的衣原体株能引起沙眼，L1、L2、L3型能引起性病性淋 巴肉芽肿， 沙眼衣原体D-K型则引起非淋菌性尿道炎。?非淋菌性尿道炎的40～50%是由沙眼衣原体感染引起的。患病人 群以青壮年为主，潜伏期1～3周。感染后引起化脓性宫颈炎，出 现脓性白带增多，外阴瘙痒。引起尿道炎时，约一半病人出现尿 急、尿频和排尿困难，与淋病性尿道炎不同的是，沙眼衣原体引 起的尿道炎无尿痛症状，或尿痛很轻微。44解脲支原体与致病性?原核细胞微生物，因生长需要尿素，能分解尿素而得名，潜伏期 2～3周；?人类泌尿生殖道常见的寄生菌，在特定环境下可致病，与许多泌尿生殖道感染症、围产期感染有关，能引起不育，是性传播疾病 的病原体之一，与女性生殖健康关系最为密切，流产超过4次以上者，检出率高达80%。?代谢特征：分解尿素产氨，使pH上升，患者小便往往带有臊腥 味。45荧光定量PCR检测NG/CT/UU应用? ?非培养或形态学诊断技术：快速、特异、敏感 对无症状或症状轻者，可以早期诊断；?? ? ?对NG/CT/UU混合感染者进行诊断和鉴别诊断；指导临床用药和疗效观察； 辅助不孕不育、优生优育的诊断； 为性传播疾病的流行病学调查及监控提供依据。46梅毒螺旋体与致病性? ?只感染人类：分获得性梅毒与胎传梅毒，梅毒患者是唯一传染源； 获得性梅毒：性接触传染；?生物学假阳性：雅司、地方性梅毒、品他三种非性病螺旋体交叉抗原，自身免疫病、风湿病、孕后期、高龄老人易出现血清学假阳性 ……晚期梅毒易出现假阴性……?FQ-PCR法：检测梅毒螺旋体DNA，特异性很强，敏感性很高，是目前诊断梅毒螺旋体的先进方法。47人类乳头瘤病毒(HPV)?? ?人是HPV的惟一宿主，引起尖锐湿疣，潜伏期1～8个月不等；传播途径：不洁性行为、接触污染的用具如毛巾、衣物等； 典型损害：初发损害为小而柔软的淡红色丘疹，米粒大，逐渐增 大增多，成为菜花样、鸡冠样赘生物，典型的尖锐湿疣一般不需 做实验室检查即可作出诊断，当患者症状不典型，部位不典型， 才需要实验室检查来帮助明确诊断；?醋白试验：简单易行，但不特异，对上皮增生或外伤初愈的上皮 可出现假阳性的结果；?PCR法：取病变组织提取DNA检测，敏感性高，特异性强。48人单纯疱疹病毒与致病性?HSV-1型主要引起腰部以上疾病：口唇疱疹、疱疹性结膜炎、脑炎 妊娠期妇女HSV-1易被激活，并可通过胎盘感染胎儿，引起胎儿畸形、智力低下及流产等；HSV常与HIV-1同时感染，目前认为HSV是调节激活HIV复制的因 素之一；?HSV-2型主要引起原发性生殖器疱疹：感染后大多不能彻底清除病毒也不能阻止复发，病毒以潜伏状态长期存在宿主体内。49人类免疫缺陷病毒是引起艾滋病的病原体50HIV与AIDS? ?三种途径传播：性传播、血液和母婴传播 PICT（医务人员主动提供HIV咨询服务）咨询服务：目标人群:育龄夫妇核心人群:婚前保健人群 孕妇、产妇、母亲 0-2岁儿童相关人群:男性 青少年 流动人口 危险行为人群?WHO 预防艾滋病母婴传播策略：（1）青年和育龄妇女HIV感染的初级预防，预防非意愿妊娠；（2）预防HIV感染者孕产期传播：PITC、知情选择终止妊娠（孕早期）；（3）继续妊娠者，选择抗病毒用药方案及咨询服务，安全分娩，避免产时 感染，为新生儿提供安全喂养的支持与咨询，随访等服务；（4）HIV感染妇女及其婴儿和家庭的关爱和支持。51荧光定量PCR检测HIV? ?筛查：“窗口期”缩短11天，无症状血清阴性患者潜在的HIV传播性； 诊断：HIV长期无进展患者，占感染人群的1%-5%指携带HIV，不需要抗逆转录病毒治疗保持无症状，CD4＞500至少8年??预防垂直传播：新生儿是否从母体感染HIV，母婴阻断！监测HIV载量的变化，判断预后转归、指导临床用药 观察长期无进展患者的自然转归：当基线外周HIV-DNA测不到时，预 示有60%几率成为疾病无进展者，而突破基线是失去无进展状态的关 键因素。52结核杆菌流行及致病性? ?我国结核病疫情仅次于印度，居世界第二！ 感染率40%，每年约25万人死于结核病；??肺部感染：原发性肺结核，开放性肺结核；肺外感染：脑、肾、骨、关节、生殖结核、肠结核、结核性腹膜 炎、全身性结核；53结核杆菌检测方法? ?痰涂片抗酸染色：阳性率低、费时 培养“金标准”：周期长（3-4周）?血清学：接种卡介苗(BCG)可出现阳性，但不能区分活动性结核和治愈后留下损伤灶的病人，且有复杂的交叉反应和假阳性；?以上均不能用于早期诊断，容易漏诊和误诊。54结核杆菌检测方法? ?能检出10copy的TB-DNA：灵敏，特异，阳性检出率高； 样本多样性适用：痰液、肺及支气管灌洗液―肺结核血液―播散性结核及各脏器的结核 CSF―中枢神经系统结核 宫颈拭子、尿道拭子―泌尿生殖道结核?可用于疗效判断。55可常规开展分子生物学检验项目核酸种类DNA类 肝炎类 DNA类 DNA类项目名称HBV-DNA HBV基因分型 HBV-YMDD变异检测RNA类DNA类 DNA类 性病类 DNA类HCV-RNA沙眼衣原体(CT)-DNA 淋球菌(NG)-DNA 解脲支原体(UU)-DNADNA类DNA类 优生优育类 呼吸道类 DNA类 DNA类人乳头瘤病毒(HPV-6,11型)-DNA单纯疱疹病毒II型(HSV II)-DNA 人巨细胞病毒(HCMV)-DNA 肺炎支原体(MP)-DNADNA类结核分支杆菌(TB)-DNA56职业暴漏以后……?立即消毒伤口，并在当天？，3周，3个月，6个月分别抽血检查 病毒抗体和基因载量，如发现阳性，即应积极进行抗病毒治疗；?首先查“感染源”患者的病毒载量，若为阴性，那感染的机会很低……57小结? ? ? ? ?荧光定量PCR是特异、灵敏、高效的基因诊断技术 对致病微生物核酸含量进行定量检测 弥补免疫检测的缺陷（如HCV） 缩短诊断的窗口期（如HIV），利于早期诊断 对治疗过程进行疗效监测??指导用药过程及剂量，以制定合理的疗效方案定量PCR的临床应用可结合临床表现，并与传统的免疫学、 影像学等诊断方法来综合评判，更为科学。58“指导非专业人员、非医学用户及医务人员获得有用及可靠的在线医学和健康信息”谢谢大家！M-phone & Email：PPT下载：/p/poshi_xu60
分子生物学方法在痰结核分枝杆菌检测中的应用价值分析_生物学_自然科学_专业资料...PCR(FQ-PCR)检查方法设为研究组,对比三组检测结 果;收集同期临床 108 例确诊...因污染而导致假阳性,成为 PCR 临床实验诊断技术应用一个难以逾越的障 碍。FQ-PCR 在全封闭状态下实现 PCR 扩增和产物分析,完全杜绝了扩增产物污染而导致的假阳性...名词解释 (1)APTT (2)CTnT (3)FQ-PCR (4) ...DNA 芯片技术的应用: 基因表达分析, 基因型和多态...临床应用 蛋白质芯片(protein array)是近年来蛋白质...FQ-PCR检测淋球菌、沙眼衣原体和解脲支原体 【摘要】 目的对 422 例患者淋球菌,沙眼衣原体和解脲支原体的检测结果 进行分析, 给临床诊治提供参考。 方法 应用荧光...采用 FQ-PCR 定量检测乙肝病 毒 DNA,结合“二对半...联合应用高价免疫球蛋白和乙肝疫苗有效地阻断母 婴...分析抗病毒治疗后 HCV RNA 血清 水平有助于总结抗...荧光定量PCR检测UU、CT及NGH的结果分析_生物学_自然...方法: 采用 fq-pcr 方法对 984 例泌尿生殖道感染...快速培养法应用与荧光定... 3人阅读 5页 ¥3....FQ-PCR 乙肝病毒 DNA 基本原理 HBV-DNA Basic ...我们分析不同基因型 HBV DNA 的序列特点,总结不同...进行电泳或放射自显影观察结果,方便了 临床上的应用...因此 PCR 在临床上可作为乙肝病毒检测的有效方法,可...(FQ-PCR PreMix Kit)(除 LIGHTCYCLER)操作说明书 ...线分析 40～50 个循环(可选) 用户可根据自己的...PCR, FQ-PCR)技术[5]、单分子 PCR 技术[6]等...指纹图谱分析技术 , 是根据 BOX 插入因子设计引物 ...中华实验和临床感 染病杂志, ): 204-...是用于从细胞内靶 DNA 的定位分析的细胞内基因扩增...r quantitive polymerase chain reaction, FQ?...实时荧光定量 PCR 仪主要应用于临床医学检测、生物...
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