全血基因组DNA提取时裂解红细胞裂解液的意义是什么?

来源:《中国现代医学杂志》2012年第35期 作者:张帅;徐锐;张强;邓勇;刘阳;赖翼;
改良盐析法提取全血基因组DNA的影响因素研究
从人抗凝全血中提取的基因组DNA已经广泛应用于医学和生物研究领域,如HLA基因分型[1]、遗传疾病诊断[2]、单核苷酸多态性(SNP)分析[3]、荧光定量PCR[4]、基因组文库构建[5]以及DNA序列测定[6]等。目前,改良盐析法以其高效、低毒、低成本的优点广泛用于各种材料的基因组DNA提取[7],基于此开发出了多种全血基因组DNA提取试剂盒。而使用该类试剂盒,仍然会出现DNA纯度差且产量低的情况,而DNA的产量与纯度的降低,将影响后续实验并增加实验成本。因此,在提取时,需要注意多种可能影响DNA产量与纯度的因素,如红细胞裂解时间、白细胞重悬方式、DNA纯化方式、DNA干燥时间、DNA溶解方式以及孵育时间等。了解上述因素对DNA提取产量与纯度的影响,有利于优化实验条件以获得高纯度、高产量的DNA。目前已有文献比较不同的全血基因组DNA提取方法[8],但缺乏对采用改良盐析法提取全血基因组DNA的影响因素的报道。本文对采用改良盐析法提取全血基因组DNA过程中,可能影响DNA产量与纯度的3个因素———红细胞裂解时间、DNA纯化方式以及DNA干燥时间进行了深入探......(本文共计5页)
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中国现代医学杂志
主办:中南大学;卫生部肝胆肠外科研究中心
出版:中国现代医学杂志杂志编辑部
出版周期:旬刊
出版地:湖南省长沙市全血基因组DNA提取试剂盒
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全血基因组DNA提取试剂盒
产品描述:
应用全血基因组DNA提取试剂盒提取的基因组DNA长度大于20kb, 可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等;每<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 9 FONT-FAMILY: V LETTER-SPACING: 0 mso-fareast-font-family: 楷体_GBul全血样品预期提取量<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 9 FONT-FAMILY: V LETTER-SPACING: 0 mso-fareast-font-family: 楷体_GBug;所提基因组DNA效果优于同类试剂;提取过程不超过45分钟。试剂盒(II)更是将裂解红细胞及有核白细胞合并进行,省去了多个步骤,其复合裂解液中含有抑制DNA酶的成分,在加热(65°C)状态下,可保证完整的基因组DNA的充分裂解释放,异丙醇沉淀时,罕见有蛋白质杂质共沉淀。本试剂盒也可用于培养细胞、组织基因组以及培养细菌或真菌基因组DNA的提取。
产品特点:
&O安全:无有机溶剂,对研究人员健康无损害。
&O快速:提取过程不超过45分钟。
&O稳定:每<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 9 FONT-FAMILY: V LETTER-SPACING: 0 mso-fareast-font-family: 楷体_GBul全血样品DNA提取量为<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 9 FONT-FAMILY: V LETTER-SPACING: 0 mso-fareast-font-family: 楷体_GBug。
试剂盒组成:
图A为10个、-20°C保存两个月的<SPAN lang=EN-US style="FONT-FAMILY: V mso-bidi-font-size: 9.0 mso-fareast-font-family: 楷体_GBul全血样本分别用Promega试剂(1、2、3号)以及本试剂(<SPAN lang=EN-US style="FONT-FAMILY: V mso-bidi-font-size: 9.0 mso-fareast-font-family: 楷体_GB号)纯化的基因组DNA的电泳图谱;以及用纯化的DNA进行两重PCR的结果(图B)。M为分子量marker。
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从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。◆
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结果稳定,产量高(典型的产量10ml全血可提取出250-500μg),纯度达1.7~1.9,长度可达50Kb-150kb,可直接用于构建文库,PCR,Southern-blot和各种酶切反应。
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本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞,细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA,
然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白,最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
试剂盒特点
◆ 从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方,裂解快速完全。
◆ 不需要使用有毒的苯酚等试剂。
◆ 快速,简捷,单个样品操作一般可在1小时内完成。
结果稳定,产量高(典型的产量3ml全血可提取出75-150μg),纯度达1.7~1.9,长度可达50Kb-150kb,可直接用于构建文库,PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
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